周俊怿， 方乐堃， 邓艳红， 刘焕亮， 王 磊， 汪建平， 黄美近

(中山大学附属第六医院，广东广州510655)

昼夜节律(circadian rhythm)是以24 h左右为周期变动的生命活动，又称近日节律［1］。越来越多的流行病学调查发现昼夜节律的紊乱与乳腺癌、结肠癌的发病相关［2－5］。动物都存在着维持昼夜节律的系统——昼夜节律蛋白，目前至少发现9种昼夜节律蛋白(Clock、Per1、Per2、Bmal1、Cry1、Cry2、Tim、酪蛋白激酶1和糖原合酶激酶3β)［6－8］。目前对昼夜节律及其调控蛋白研究日益深入，昼夜节律对结直肠癌的发生、发展、预后存在影响，但目前尚未有报道使用昼夜节律蛋白对结直肠癌的预后进行评估。本文旨在探索用昼夜节律蛋白Cry2对结直肠癌的预后及新辅助化疗敏感性、新辅助化疗后的生存期进行预测。

材料和方法

1 材料与对象

选16名规律地接受包含5－氟尿嘧啶的新辅助化疗的结直肠癌切除术患者。使用结肠镜获取新辅助化疗之前的肿瘤标本。通过CT/MRI计算肿瘤体积的减少率或肿瘤反应速度，从而反映化疗疗效。使用实体肿瘤疗效评估标准来评估化疗疗效:完全反应(complete response，CR;病灶消失)、部分反应(partial response，PR;缩小≥30%)、病灶稳定(stable disease，SD;缩小＜30%或增大≤20%)和病灶进展(progress disease，PD;增大≥20%)。同时，我们收集307名在2001年至2005年间接受结直肠癌切除术的患者的肿瘤标本与随访资料，这些患者未接受新辅助治疗。本研究通过医院伦理委员会的批准。以总生存为结束点，生存时间从手术当天算起，直至死亡或者最后一次随访的时间。

2 主要试剂

免疫组化试剂盒和3，3'－二氨基联苯胺(3，3'－diaminobenzidine，DAB;北京中杉金桥生物技术有限公司);兔单克隆抗体Cry2(Abcam)。……