赵戬，潘春玲，刘俊超，李倩，潘亚萍

（中国医科大学口腔医学院牙周科，辽宁省口腔医学研究所牙周病学研究室，沈阳 110002）

牙周致病菌侵袭牙龈上皮细胞能够诱导多种细胞因子如 TNF-α、IL-8 等的过度表达［1］，使组织细胞释放较多的基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs），造成牙周组织中胶原纤维的降解［2］。当细菌侵入组织深处时，牙周膜细胞对牙周致病菌的反应将成为牙周组织继续破坏的关键。本研究目的在于通过检测不同浓度的TNF-α刺激人牙周膜细胞（humanperiodontal ligment cells，hPDLCs）表达MMP-9的水平，探讨细菌、细胞因子和MMPs之间可能存在的复杂调控网络在慢性牙周炎中的重要作用。

1 材料与方法

1.1 hPDLCs的培养

刮取正畸原因拔除的健康无龋前磨牙的牙周膜组织，原代培养hPDLCs，取第4代细胞鉴定细胞来源，结果显示抗波形丝蛋白染色阳性，抗角蛋白染色阴性，证实来源于外胚间充质的hPDLCs。取第5代细胞用于实验［3，4］。

1.2 TNF-α刺激hPDLCs

实验组 1分别以不同浓度（1、2、5 ng/mL）的人重组TNF-α（博士德生物工程有限公司，武汉）与hPDLCs均匀混合24 h；实验组2以2 ng/mL的TNF-α 分别处理 hPDLCs 6 h、12 h、24 h、48 h；未经刺激的hPDLCs作为对照组。收集细胞上清液，用于MMP-9浓度的检测。

1.3 ELISA检测MMP-9浓度

采用人MMP-9 ELISA试剂盒（博士德生物工程有限公司，武汉）检测TNF-α刺激后的hPDLCs培养上清液相应蛋白含量。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 不同浓度的TNF-α刺激hPDLCs表达MMP-9的水平

0、1、2、5 ng/mL TNF-α 刺激 hPDLCs 24 h 表达MMP-9的水平分别为（0.628±0.314）ng/mL、（1.995±0.789）ng/mL、（4.129±1.525）ng/mL、（7.982±2.879）ng/mL。与对照组相比，各刺激组细胞表达MMP-9水平均显著增高（P<0.01），且各刺激组组间差异具有统计学意义（P<0.01）（图 1）。

2.2 2 ng/mL的 TNF-α刺激 hPDLCs不同时间MMP-9的表达水平

以2 ng/mL浓度的TNF-α分别刺激hPDLCs 6 h、12 h、24 h 及 48 h，hPDLCs表达 MMP-9 的水平分别为（1.074±0.427）ng/mL、（1.635±0.763）ng/mL、（4.129±1.525）ng/mL、（6.747±2.257）ng/mL。对照组（刺激0 h）的hPDLCs没有检测到MMP-9表达，6 h～12 h时MMP-9出现表达增强，之后持续增强。……