郭毅，孔繁明，赵楠

（1.中国医科大学附属第一医院妇科，沈阳 110001；2.辽宁省宽甸县中心医院妇产科，辽宁 宽甸 118200）

EB病毒是第1个被发现的人类肿瘤病毒，与多种淋巴细胞增殖性疾病的发生相关。在体外，EB病毒可将静止的B细胞转化为具有无限增殖能力的潜伏感染的B细胞，即淋巴母细胞样B细胞系。此过程的关键调控因子包括EB病毒核抗原（Epstein-Barr nuclear antigen，EBNA）2、EBNA3A、EBNA3C 和LMP1 蛋白［1，2］。EBNA3C 作为转录调节因子能够与多种细胞及病毒因子相互作用。Gemin3是EBNA2、EBNA3C 及运动神经元生存因子的结合蛋白［3，4］，属于DExD/H框RNA解旋酶家族，在RNA代谢过程中起重要作用［5，6］。Gemin3还可结合并调控多种细胞转录因子［7～11］。我们的前期研究结果显示：Gemin3可抑制p53介导的转录和凋亡途径，提示肿瘤病毒可能通过调控Gemin3靶基因的表达而抑制宿主细胞的凋亡。因此，本研究拟通过慢病毒载体介导发卡RNA干涉敲减EBNA3C基因的表达，探讨EBNA3C与Gemin3的相互作用。

1 材料与方法

1.1 材料

pA3F-EBNA3C质粒表达EBNA3C全长，羧基端由Flag标记。HEK293为经腺病毒DNA转化的人胚胎肾细胞系，LCL1和LCL2为体外转化的EBV阳性细胞系，表达EBNA3C的细胞系（BJAB7 and BJAB10）由pZipneo真核细胞表达载体介导转染EBNA3CcDNA，并经过新霉素选择建立，以上质粒及细胞系均由宾夕法尼亚大学医学院Erle Robertson教授馈赠。鼠抗Gemin3单抗由宾夕法尼亚大学医学院Gideon Dreyfuss惠赠，鼠抗Flag单克隆抗体M2购自Sigma-Aldrich公司，鼠抗EBNA3C单抗A10来自杂交瘤。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养：HEK 293细胞采用 DMEM（Hy－Clone公司）培养基培养，BJAB，RAMOS和EBV阳性的细胞系采用RPMI1640培养基培养，分别加入10%胎牛血清，50 U/mL青霉素，50 μg/mL链霉素和2 mmol/L L-谷氨酰胺。在37℃、5%CO2、饱和湿度环境下培养。

1.2.2 转染：采用Bio-Rad Gene PulserⅡ型电穿孔仪瞬时转染细胞。……