含冰片制剂中冰片的质量控制

2012-09-06杨瑞瑞郄留霞陕西省食品药品检验所西安710061

陕西中医 2012年1期

杨瑞瑞吴芳郄留霞陕西省食品药品检验所（西安 710061）

冰片为常用中药，具有开窍醒神，清热止痛的功效。多用于热病神昏、惊厥，中风痰厥，气郁暴厥，中恶昏迷，胸痹心痛，目赤，口疮，咽喉肿痛，耳道流脓。多入丸、散、片、胶囊等剂型使用。冰片、天然冰片、艾片在《中国药典》2010年版一部中均有收载，【含量测定】项下分别测定龙脑、右旋龙脑、左旋龙脑，并且在各自的【检查】项下收载了樟脑的检查。

我们查到的《中国药典》2010年版一部、《中成药地标升国标》、《卫生部药品标准中药成方制剂》、《新药转正标准》等现行标准中共涉及到的含冰片制剂约890个品种，15类剂型，仅有74个品种在制剂项下对冰片含量进行控制。大部分含冰片的制剂中没有冰片的控制指标，或有的仅在【鉴别】项下通过薄层色谱法、化学反应等方法进行控制。

为了有效控制含冰片制剂中冰片的质量，通过大量的实验工作，建立了含冰片制剂中冰片的含量测定及樟脑限量检查方法，并对部分常用制剂进行了测定。

1 仪器、试药及试剂 1.1 仪器 Agilent 6890N气相色谱仪，FID检测器；XWK－Ⅲ无油空气泵（天津华生分析仪器厂）；Sartorius AG ME 235S型电子分析天平。超声波清洗器（无锡超声电子设备有限公司）。

1.2 对照品及试剂冰片对照品（批号为11671－200401），天然冰片对照品（批号为 111688－200501），樟脑对照品（批号为110747－200206）均购自中国药品生物制品检定所；水杨酸甲酯、乙醇、无水乙醇、乙酸乙酯等试剂均为分析纯。

1.3 样品样品均为市售，阴性对照样品系按处方和生产工艺自制不含冰片的制剂。

2 对照品溶液、内标溶液及供试品溶液的制备

2.1 内标溶液的制备精密称取水杨酸甲酯2.0g，置于1000mL容量瓶中，加入乙酸乙酯至刻度，摇匀，作为贮备液；精密量取贮备液250mL，置于1000mL容量瓶中，加入乙酸乙酯至刻度，摇匀即得。

2.2 对照品溶液制备及校正因子计算取冰片对照药材适量，精密称取两份，分别置25mL量瓶中，加内标溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2μL，注入气相色谱仪，计算校正因子。见表1。

表1 校正因子计算结果

2.3 供试品溶液的制备 2.3.1 片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、散剂：样品研细后取样适量（使制成的溶液中冰片含量约为0.4mg／mL），置适宜的容量瓶中，加内标适量超声15min，放凉，加内标溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3.2 液体制剂：注射剂、口服液等可用内标液直接稀释制成供试品溶液（含冰片约0.4mg／mL）。

2.3.3 大蜜丸：取大蜜丸，剪碎，取适量，精密称定，精密加入硅藻土等量，研匀，精密称取适量，置锥形瓶中，精密加适量内标液密塞，称定重量，超声处理15min，放冷，再称定重量，用内标液补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得（含冰片约0.4mg／mL）。

2.3.4 膏剂：取适量膏剂，剪成条状，置500mL圆底烧瓶中，加入150mL水，连结挥发油提取器，由挥发油测定器上端加水至溢流入圆底烧瓶为止，加入1mL甲苯，加热回流4h，静置冷却，取甲苯层置于适宜的量瓶，并用适量的乙酸乙酯洗涤挥发油测定器，洗涤液并入量瓶中，加适量内标贮备溶液后，用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀即得（每mL含内标0.5mg、含冰片约为0.4mg）。

3.试验方法与结果 3.1 色谱条件选择条件一：采用弹性石英毛细管柱（柱长30m，内径0.320mm，膜厚度0.50μm）DB－WAX（聚乙二醇－20M，Agilent公司）；程序升温：初始温度120℃，以每min10℃的速率升温至180℃，保持3min；进样口温度为220℃，检测器温度为250℃；分流比为5：1。

条件二：程序升温：初始温度110℃，以每min10℃的速率升温至180℃，保持3min；其余同条件一。

条件三：采用弹性石英毛细管柱（柱长30m，内径0.320mm，膜厚度0.25μm），HP－FFAP（聚乙二醇硝基苯改性，Agilent公司）；程序升温：初始温度120℃，以每分钟10℃的速率升温至180℃，保持3min；其余同条件一。

条件四：采用弹性石英毛细管柱（柱长30m，内径0.320mm，膜厚度0.25μm）OV－17（苯基甲基硅酮，涂布浓度为10%）；其余同条件一。

实验结果表明，各条件下（除条件四外），分离度、理论塔板数等相关参数无显著差异，龙脑、异龙脑及内标物（水杨酸甲酯）色谱峰分离度均大于4，理论板数按龙脑峰计算均不低于4000。条件四下，樟脑和龙脑、异龙脑不能达到基线分离。综合考虑后选择色谱条件一作为实验用色谱方法。

3.2 提取溶剂选择精密称取3份研细后的样品（冠脉宁胶囊）适量（约含冰片10mg），分别置于25mL；量瓶中，各加内标溶液（内标溶液分别用乙酸乙酯、乙醇和无水乙醇配制）20mL，超声15min，放冷，加内标溶液至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过后，精密吸取2μL，注入气相色谱仪，测得峰面积，计算含量。

试验结果表明，分别用乙酸乙酯、乙醇和无水乙醇作为溶剂，测定样品中冰片含量，结果没有显著差异。乙酸乙酯提取的供试品溶液，杂质相对较少，并且可用于对液体制剂进行萃取，和《中国药典》2010年版一部中冰片含量测定所用溶剂一致。故供试品溶液的提取（萃取）选乙酸乙酯作为溶剂。

3.3 专属性试验按测定用样品的处方和生产工艺，自制不含冰片的阴性对照样品，按照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照品溶液。按拟定的色谱法测定，记录色谱图。结果表明本方法测定冰片具有专属性。见图1。

图1 对照品、样品、阴性溶液气相色谱图

3.4 线性关系考察精密称取冰片对照药材122.56mg，置25mL容量瓶中，加内标溶液（水杨酸甲酯浓度0.5046mg／mL）至刻度，摇匀，制成每1mL中含冰片4.9024mg的溶液，作为储备液；精密吸取上述储备液适量，依次加内标溶液（每1mL中含水杨酸甲酯0.5046mg）稀释，分别制成1.9610mg·mL－1、0.9805mg· mL－1、0.4902mg· mL－1、0.1961mg· mL－1、0.0980mg· mL－1、0.0490mg·mL－1的溶液做为对照溶液；分别吸取上述储备液及稀释后的各溶液2μL，注入气相色谱仪，记录色谱图，计算峰面积。以冰片峰面积与内标峰面积之比对进样量进行线性回归，求得方程为y＝1.3582x-0.0108，r＝1.00；表明冰片在0.098048μg～9.8048μg间呈良好的线性关系。

3.5 精密度试验精密吸取对照品溶液2μL，注入气相色谱仪，连续进样6次，记录色谱峰，计算冰片峰面积与内标峰面积之比。结果比值均值为1.1165（n＝6），RSD为0.62%。表明精密度良好。

3.6 稳定性试验取供试品溶液，每隔4h进样1次，测定样品溶液在24h内的峰面积，计算冰片峰面积与内标峰面积之比。结果比值均值为1.1158（n＝7），RSD为1.35%，表明样品溶液制备后在24h内进样稳定性较好。

3.7 重复性试验取冠脉宁胶囊样品，研匀，取约0.20g，精密称定，置锥形瓶中，精密量取内标溶液（每1mL中含水杨酸甲酯为0.5046mg）10mL，称定重量，超声15min后，放冷，再次称定重量，用内标溶液补足减失的重量。同法制备7份供试品溶液。按拟定的色谱方法测定，计算含量。结果冰片含量值为20.50mg·g－1，RSD为1.22%，表明重复性良好。

3.8 加样回收率试验取冠脉宁胶囊样品，研匀，取约0.1g（含冰片为20.50mg／g），精密称取7份，分别置于具塞锥形瓶中并依次编号1～7。精密称取冰片对照药材20.6mg置100mL容量瓶中，加内标溶液（每1mL中含水杨酸甲酯为0.5046mg）溶解至刻度，制成对照品溶液。精密量取对照品溶液10mL分别加入1～7号锥形瓶中，同供试品溶液制成测定用溶液，按拟定的色谱方法测定，计算加样回收率。结果表明加样回收率良好。实验数据及结果见表2。