蒋翡翎，单保恩，姚 敏，魏小斌，伍 燕，邓碧兰

(1.海口市人民医院检验科，海南 海口 5702082.河北医科大学第四医院科研中心，河北 石家庄 050011)

我们前面已有实验证明活卡介苗(BCG)的有效组分BCGE2和BCGE3在体外可以诱导小鼠脾淋巴细胞增殖及产生细胞因子[1]，并且BCGE2和BCGE3还可以诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生NO[2]，因此BCGE2和BCGE3可以作为免疫调节剂来诱导小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞。那么这些经诱导激活的小鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞是否具有杀伤或抑制作用呢？本研究旨在将人膀胱癌细胞株T24作为靶细胞对BCGE2的体外抗肿瘤活性进行了初步研究。

1 材料与方法

1.1 实验动物 6～8周龄的昆明小鼠、体重18～22 g，购于河北医科大学实验动物中心。

1.2 主要试剂 BCG购于北京生物制品研究所，胎牛血清为杭州四季青生物工程材料公司生产，Sephadex G100凝胶层析柱购自Sigma公司，RPMI1640为GIBCO公司产品，Gress试剂购自华美生物公司，肿瘤细胞株T24由河北医科大学附属第四医院科研中心提供。

1.3 BCG蛋白提取液的制备及蛋白含量测定 用酶裂解法和超声波破碎法对活BCG进行裂解，用紫外吸收法测定其上清液中蛋白质(BCGE)的纯度；用考马斯亮蓝G250法测定蛋白含量。

1.4 BCGE蛋白活性组分的分离 将BCGE上样于Sephadex G100凝胶层析柱，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗脱，每管收集2 ml层析液，分离后得到3个组分，分别命名为 BCGE1、BCGE2和 BCGE3，其相对分子质量分别为42500 D、36300 D和28600 D。

1.5 肿瘤细胞株悬液制备 肿瘤细胞株T24细胞培养在RPMI1640完全培养液中，置于37℃，饱和湿度，5%CO2的培养箱中培养，待细胞进入对数生长期后收集细胞，用RPMI1640完全培养基调整成浓度为1×105个/ml的细胞悬液备用。……