董小跃，张盛燕

（瑞安市妇幼保健院妇产科，浙江 瑞安 325200）

宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一。虽宫颈癌的诊断及治疗方面取得一定的进展，但仍有20%～34%的早期宫颈癌患者最终死于肿瘤的复发和转移。血循环中微转移的存在，提示肿瘤已不再局限于原发灶，有发展为远处转移的可能。早期诊断外周血中的微转移，有助于我们更有针对性地进行个体化的术后辅助治疗，减少复发和转移，提高患者的生存率和生活质量。本研究利用RT-PCR技术检测早期宫颈癌外周血中上皮源性特异性标志基因MMP-9 mRNA的表达，探讨它们在宫颈癌外周血中的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 研究对象 选择2005年1月至2010年6月间我院首诊的98例宫颈癌患者为研究对象。年龄22～78岁，平均48岁。临床分期[按照2000年国际妇产科联盟(FIGO)的标准]：ⅠA期8例，ⅠB期48例，ⅡA期7例，ⅡB 22例，Ⅲ期10例，Ⅳ期3例。按病理类型：鳞癌85例，非鳞癌13例；所有早期宫颈癌患者均予子宫次广切或子宫广切及盆清术，术后标本均行病理检查。对照组为同期手术的妇科良性肿瘤25例，其中子宫肌瘤18例，卵巢囊肿3例，子宫肌腺症1例，子宫内膜异位症3例。

1.2 主要试剂和仪器 Trial试剂(GIBLO公司)；逆转录酶M2MLV(Promega公司)；Taq酶(Sangon公司)；Light Cycler荧光PCR仪(德国Roche公司)。

1.3 方法 患者初诊治疗前抽取静脉血5 ml(弃去开始的1 ml，以防上皮细胞污染)，于20 min内用淋巴细胞分离液分离单个核细胞。用Trizol试剂(上海复星公司)进行总RNA的提取。测A260～280处的吸光值，并计算RNA含量。然而进行逆转录反应合成cDNA后再行PCR扩增。PCR反应条件：93℃ 2 min，93℃ 45 s，55℃ 60 s，共做40个循环。结果分析参考试剂盒。……