童武，徐彦召，周艳君，姜一峰，张善瑞，王亚欣，朱建平，虞凌雪，孙晶，陈焕春，童光志

1 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 2002412 华中农业大学动物医学院，湖北 武汉 430070

表达O型口蹄疫病毒保护性抗原表位重组PRRSV的构建及其鉴定

童武1,2，徐彦召1，周艳君1，姜一峰1，张善瑞1，王亚欣1，朱建平1，虞凌雪1，孙晶1，陈焕春2，童光志1

1 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241
2 华中农业大学动物医学院，湖北 武汉 430070

童武, 徐彦召, 周艳君, 等. 表达O型口蹄疫病毒保护性抗原表位重组PRRSV的构建及其鉴定. 生物工程学报, 2012,28(12): 1431−1440.

Tong W, Xu YZ, Zhou YJ, et al. Construction and identification of a recombinant PRRSV expressing protective antigens of type O foot-and-mouth disease virus. Chin J Biotech, 2012, 28(12): 1431−1440.

以高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗的感染性分子克隆 (rHuN4-F112) 作为载体，将 O型口蹄疫病毒 (FMDV)VP1基因的421～480nt (141～160aa) 和598～639nt (200～213aa) 两优势保护性抗原表位串联成的目的基因，通过突变PCR的方法插入Nsp2中的508～532位缺失区域，经体外转录后转染至BHK-21细胞中培养36 h，将上清接种至MARC-145细胞中培养，并在MARC-145细胞中连续传代，拯救重组病毒。经RT-PCR扩增，MluⅠ酶切及测序验证，结果表明插入的外源基因及人为突变的MluⅠ分子标记都正确，说明重组病毒拯救成功，且该重组病毒能够在MARC-145细胞中稳定传代，将此重组病毒命名为rPRRSV-F112-O/VP1ep。rPRRSV-F112-O/VP1ep能够在MARC-145细胞上引起明显的细胞病变，间接免疫荧光检测表明外源基因在该病毒中成功获得了表达。经过生物学特性分析，该病毒的TCID50=-log10-6.75/0.1 mL, 且在MARC-145细胞中整体生长速度与其亲本病毒rHuN4-F112(△508-532) 相似，但明显高于rHuN4-F112病毒。

猪繁殖与呼吸综合症病毒，O型口蹄疫病毒，感染性分子克隆，重组病毒

口蹄疫 (FMD) 是由口蹄疫病毒 (FMDV)引起的一种烈性传染病，该病主要感染猪、牛、羊等重要偶蹄动物。……