董洪亮，韩先干，白灏，何亮，刘蕾，刘瑞，柴同杰，丁铲，刘海文，于圣青

1 山东农业大学动物科技学院，山东 泰安 2710002 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241

λpL/pR-cI857温控系统的改造及其对大肠杆菌菌蜕制备的影响

董洪亮1,2，韩先干2，白灏2，何亮2，刘蕾2，刘瑞2，柴同杰1，丁铲2，刘海文2，于圣青2

1 山东农业大学动物科技学院，山东 泰安 271000
2 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241

董洪亮, 韩先干, 白灏, 等. λpL/pR-cI857温控系统的改造及其对大肠杆菌菌蜕制备的影响. 生物工程学报, 2012,28(12): 1423−1430.

Dong HL, Han XG, Bai H, et al. Mutation of λpL/pR-cI857 system for production of bacterial ghost inEscherichia coli. Chin J Biotech, 2012, 28(12): 1423−1430.

菌蜕是革兰氏阴性菌在噬菌体Phix174的溶菌基因E的作用下形成的细菌空壳，通常由λpL/pR-cI857温控系统通过调控E基因的表达制备。通过重叠PCR技术，将λpL/pR-cI857温控系统中λpR启动子的第2个操纵基因 (OR2) 的第9位碱基由T突变为C (T→C)。溶菌试验结果表明，突变后的λpL/pR-cI857系统在37 ℃时仍能稳定抑制基因E的表达，对大肠杆菌的溶菌率为99.9%。通过对λpR启动子的改造，扩大了λpL/pR-cI857温控系统的温度调控范围，为菌蜕疫苗的研制提供了参考。

大肠杆菌，菌蜕，重叠PCR，突变

菌蜕 (Bacterial ghost) 是通过PhiX174噬菌体溶菌基因E的可调控表达而形成的缺少细胞浆和核酸且无繁殖能力的革兰氏阴性细菌空壳[1]。溶菌基因E编码91个氨基酸的疏水蛋白，它能在革兰氏阴性细菌细胞膜上形成一个直径约为40～200 nm的特异性的跨膜孔道，在渗透压的作用下使革兰氏阴性细菌的胞质内含物由孔道排出，从而形成不含核酸、核糖体及其他组分的细菌空壳[2-6]。菌蜕作为一种新型的疫苗，与传统的灭活疫苗相比，菌蜕保持了细菌原有的细胞形态、细菌表面抗原结构和黏附性等特性，因而能诱导机体产生更强的体液免疫、细胞免疫以及黏膜免疫[7-10]。……