钟传青，黄为一

(1.山东建筑大学市政与环境工程学院，山东 济南 250101;2.南京农业大学生命科学学院，江苏 南京 210095)

0 引言

凡促使磷酸中的酯和酐水解的一大类酶，统称为磷酸酶，磷酸酶是土壤中最活跃的酶类，其酶促反应能够加速有机磷的脱磷速度[1]。磷酸酶是表征土壤生物学活性的重要酶之一[2]，其活性可作为衡量土壤肥力的指标;产生酸性磷酸酶的生物有微生物、原生动物和植物等;产生碱性磷酸酶的生物有微生物、藻类、蚯蚓等[3]。编码磷酸酶的基因已经被克隆出来[4]，张国庆等分离纯化了一株内生真菌中的酸性磷酸酶[5]。

磷是促进植物生长的重要元素之一[6]，无论是酸性磷酸酶还是碱性磷酸酶，均与土壤有效磷有很强相关性[7]。P17菌株为作者从南京市化工磷肥厂区磷矿粉与土的混合物中分离出的一株解磷微生物，经鉴定属于巨大芽孢杆菌属，该菌株能够分泌高活性的磷酸酶[8]，将土壤中难溶性有机磷转化为有效磷，从而可以直接被植物生长利用。作为一种酶类，磷酸酶的活性受多种因素影响，为保证解磷微生物P17菌株施入土壤后发挥高的解磷活性，本课题组研究了P17菌株发酵过程中影响磷酸酶活性的因素，并确定该酶的定域，为巨大芽孢杆菌磷酸酶制剂的制备及下游生产提供理论依据。

1 实验材料与方法

1.1 仪器与材料

仪器:摇床，显微镜，分光光度计，离心机等。

菌株:P17菌株。

培养基:NBRIP培养基。其成分为:Ca3(PO4)25.0g，(NH4)2SO40.1g，MgSO4·7H2O 0.25g，KCl 0.2 g，葡萄糖10.0g，MgCl2·7H2O 5.0g，蒸馏水 1000mL，pH6.8 ～7.0。

1.2 试剂

磷酸酶活性测定:改进的MUB缓冲液;0.025M对硝基苯磷酸二钠溶液;0.5M氯化钙;0.5M氢氧化钠;标准对硝基酚溶液。……