程结南,李 平,程 跃,章文信,蔡亚非

(安徽师范大学生命科学学院,芜湖 241000)

丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine protein kinase,STK)是细胞中广泛存在的一种化学酶,其家族包括很多成员,主要是通过特异地催化蛋白质的丝氨酸、苏氨酸残基磷酸化来参与细胞的增殖、分化、凋亡等生命活动。小鼠STK31基因位于第6号染色体上,其编码产物含有1018个氨基酸。目前已发现STK31与癌症及精子发生相关,而与脊髓损伤的关系还未见报道。本文旨在结合我们实验室前期工作并通过分子手段来确定STK31与脊髓损伤的潜在关联,为脊髓损伤研究提供新的靶点。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物及分组 实验动物为本实验室繁殖的7～8周龄成年昆明小白鼠。随机挑选50只健康小白鼠,分为空白对照组和脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)处理组,其中空白对照组(A组)为假损伤组,只切开椎板不进行损伤处理即缝合;SCI处理组被设置为5个小组(n=5):B(损伤后4 h)、C(损伤后8 h)、D(损伤后1 d)、E(损伤后3 d)、F(损伤后7 d)。

1.1.2 仪器及试剂 Ultrospec 4300紫外分光光度计为瑞士安法玛西亚公司产品;ABI 7300 PCR扩增仪为美国应用生物系统(ABI)公司产品;RNA的提取及逆转录试剂购自上海生工;DNA扩增试剂及标准品购自广州市达晖生物科技有限公司;其他试剂均为国产分析纯。

1.2 方法

1.2.1 制作脊髓损伤模型 使用Nystrom法构建脊髓损伤模型。腹腔注射5%的水合氯醛麻醉小鼠,使其俯卧在实验手术台上并固定,沿着T8中线切开背部皮肤及附着组织,除去锥板,小心暴露脊髓,并用重物压迫脊髓,以下肢剧烈收缩作为其有效性的依据,压迫面积0.1 cm×3 cm,压迫5min,使小鼠脊髓中度受伤,然后移去重物,用生理盐水冲洗伤口后进行缝合;对照组只切开锥板不对脊髓进行损伤处理。……