鲁严，周梅华，李雪，吴迪，王大光，朱文元

（南京医科大学第一附属医院,南京 210029）

自体黑素细胞移植是一种常用的治疗稳定期白癜风的外科疗法，该疗法原理是将自身正常表皮的黑素细胞通过体外培养扩增后移植到白癜风皮损处，使此处黑素细胞得以补充、成活，从而在皮损处产生色素。以往该法因细胞悬液滴种时常因受植部位、体位的变化，常常不能均匀分布，复色效果会受到影响，我们拟研制一种以卡波姆（carbomer）胶为基质的载体，克服以上缺点，可以用于黑素细胞涂布法移植，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 卡波姆940购自美国Noveon公司，Ham F12培养基、DMEM培养基、胎牛血清（fetal bovine serum,FBS）、胰蛋白酶、分散酶（dispase enzyme）购于美国 Gibco 公司，geneticin（G418）、左旋多巴（Laevodopa,L-DOPA）、12-0-十四酰佛波醇-13-乙酸酯（12-0-Tetradecanoylphorbol 13-acetate,TPA）、 噻 唑 蓝 [3-（4,5-Dimethyl-2-Thiazolyl）-2,5-Diphenyl Tetrazolium Bromide,MTT]均购于美国Sigma公司。实验家兔由南京医科大学动物实验中心提供。

1.2 方法

1.2.1 黑素细胞培养 标本来自我院泌尿外科健康男性包皮环切术后丢弃表皮组织。按照Swope等的方法[1]，去除包皮的皮下组织，并剪成小皮片，经Dispase酶4℃消化分离表真皮，表皮经0.25%胰蛋白酶消化后获得单细胞悬液，接种于含常规黑素细胞培养基的培养瓶中，置于5%CO2培养箱37℃孵育。6 h后换液1次去除未贴壁细胞，48 h后改用不含geneticin的培养基，3天后换液，加入含40 μg/L TPA的黑素细胞培养基进行纯化培养。当细胞长满70%～80%时，用2.5 g/L胰酶消化传代。黑素细胞鉴定采用 HMB45（human melanoma black-45）和马森卡塔纳氏（Masson-Fontana）染色。

1.2.2 卡波姆胶半固体培养基的配置 称取卡波姆9 405 g，与500 mL含TPA的培养基混合均匀，即得质量分数为1%卡波姆940黑素细胞载体胶液，注意配制时将卡波姆940干细粉分次撒于培养基液面上，使其充分溶胀，避免结块。……