张兴丽,李 娟

(佳木斯大学附属第一医院循环一科,黑龙江 佳木斯 154003)

目前认为,CD40L不仅参与急性心肌梗死的发生发展,而且因其可对 MM Ps的激活及刺激巨噬细胞、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞表达组织因子而可能起到关键性的作用[1,2]。CD40L可通过其可溶性 CD40L的形式与 B淋巴细胞、巨噬细胞等于血管平滑肌上的 CD40相互作用,刺激这些细胞产生大量的与 AMI相关的生物活性因子:如 E-选择素、黏附因子、细胞因子、基质金属蛋白酶等 ,参与 AM I斑块内重要细胞成分的反应调节[3]。给予急性心肌梗死患者长期他汀类药物治疗,可有效减轻体内炎症反应并改善血管内皮功能[4～6]。本实验采用酶联免疫法分别检测对照组、实验组(A组 B组)血清 CD40L的浓度变化,探讨瑞舒伐他汀对急性心肌梗死患者 CD40L浓度的变化的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取佳木斯大学附属第一医院诊断为急性心肌梗死患者 48例为实验组,随机分为 A、B两组,每组 24例,A组入院后口服瑞舒伐他汀 10mg/qd两周,其中男17例,女7例,年龄32～77岁 ,平均 (56.75±11.59)岁;B组入院后口服瑞舒伐他 汀 20mg/qd 两 周 ,其男 16例 ,女 8例 ,年 龄 44～78岁 ,平 均(59.50±10.09)岁;另外选取健康对照组32例,取肘静脉血分离血浆冻存待测,其中男23例,女9例,年龄16～88岁,平均(49.37±17.64)岁。

1.2 排除标准

①2～4周内发生出血性疾病。②感染、恶性肿瘤、自身免疫性疾病。③肝肾疾患、心肌炎、心肌病。④8周内未曾应用过免疫抑制剂和调脂药物等,具有完整的临床资料。

1.3 试验方法

对照组清晨采空腹肘静脉血6mL,实验组分别采用药前及用药后两周空腹肘静脉血6mL,室温下静止30min,离心每分钟3000转,离心15min后用 EP管留取2mL血清,储存于-20℃冰箱中待测白细胞分化抗原40配体。采用常规酶联免疫法法。主要药品及试剂为瑞舒伐他汀、人白细胞分化抗原40配体定量检测试剂盒 (ELISA)。

1.4 结果判定

测定450nm波长下 OD值 ,根据标准品和样品的 OD值,计算样本申人白细胞分化抗原40配体含量。根据标准品的浓度及对应的 OD值,计算出标准曲线的直线回归方程,再根据样本的 OD值,在回归方程上计算出对应的样品浓度,也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

1.5 统计学处理

采用 SPSS17.0软件包进行统计学处理,计量资料以均数±标准差 (±s)表示,组间、计量资料比较采用两独立样本的 t检验,用直线相关分析法分析相关指标间相关性。计数资料比较采用 i2检验 ,不符合i2检验应用条件的情况 ,选择Fisher精确概率法。P ＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

实验组、正常对照组一般资料比较,各组间性别、年龄、吸烟史、高血压病、糖尿病差异无统计学意义 (P＞ 0.05)。见表1。

实验组较对照组 CD40L水平显著增高 (P＜0.01),见表2。

表2 实验组与对照组 CD40L比较

实验组 B组与 A组用药后 CD40L水平均显著性下降(P ＜0.01);实验组 B组较 A组用药后 CD40L水平显著性下降 (P ＜ 0.05)。见表3。

表3 实验组(A、B组)用药后 CD40L浓度

3 讨论

急性心肌梗死是多种因素相互作用和影响的结果。目前研究已经明确炎症在导致动脉粥样斑块稳定性的发生、发展过程起着重要的作用,而动脉粥样斑块的稳定性与急性心肌梗死的病理基础与发病过程紧密相关。Van derwal[7]等人对因急性冠脉事件死亡的人的尸捡标本进行研究,通过免疫组化等方法发现在板块破裂出有大量巨噬细胞和 T淋巴细胞的表达。CD40L是一种跨膜糖蛋白,可溶性 CD40L具有强的生物活性,可与 B淋巴细胞、巨噬细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞上的 CD40相互作用,刺激这些细胞产生大量与 AMI相关的生物活性因子,参与 AM I斑块内主要细胞成份的炎症反应调节,在这些过程中贯穿于急性心肌梗死的发生发展。动物实验证实[8]在实验大鼠体内注射 CD40L的特异性抗体可明显减轻动脉粥样硬化斑块的形成,并可影响进展期的斑块稳定。我们通过对48例急性心肌梗死患者和32例对照组患者 CD40L研究发现,急性心肌梗死患者 CD40L水平显著增高,这与学者严金川[9]等研究得到的结果相似 ,严金川等应用间按免疫荧光法和 ELISA法证实,不稳定性心绞痛患者外周血单核细胞表达及血清 sCD40L水平明显高于对照组和稳定性心绞痛患者:稳定性心绞痛患者 sCD40L高于对照组,但其单核细胞表达 CD40L与对照组无差异:PTCA患者前后 sCD40L有差异,而单核细胞表达 CD40L无差异,提示不稳定性心绞痛患者血清中升高的 sCD4OL可能来自不稳定的斑块,不稳定性心绞痛患者 CD40L表达升高可能是由于患者血中存在刺激单核细胞高表达 CD40L的成分。再次证实了急性心肌梗死患者 CD40L水平显著增高,并且提示急性心肌梗死患者存在着动脉粥样硬化斑块的不稳定及炎症反应,而 CD40L与斑块的不稳定性与炎症反应密切相关。

Schonbeck[10]对发现氧化低密度脂蛋白促进人血管细胞表达 CD40与 CD40L,并受他汀类药物抑制,同时动脉粥样硬斑块块的进展受到抑制。在 AM I患者中应尽早应用他汀类药物干预[11],我们的实验发现实验组 B组与 A组用药后比用药前 CD40L水平显著降低,瑞舒伐他汀对抑制 CD40L存在显著效果;实验组用药后 B组较 A组 CD40L水平显著降低,我们的结果与孟祥雁[12]等发现相似 ,孟祥雁等研究发现AMI患者应用不同剂量瑞舒伐他汀可有效降低血清中sCD40L水平并呈剂量相关性。国外学者 Aukrust[13]研究发现他汀类在抑制炎症、改善血管平滑肌细胞功能的氧化过程、改善内皮功能、抑制血栓形成等方面具有多向性效应作用。我们的研究再一次表明用药后实验组 B组与 A组CD40L平均存在明显剂量依赖。长期应用大剂量瑞舒伐他汀过程中可能会降低血清炎症因子更多,并且可能会减少冠状动脉斑块基质成分降解和炎症反应,增加急性心肌梗死斑块的稳定性。抑制 CD40L有可能会降低急性心肌梗死的发生,以及延缓疾病的复发。

本研究中 CD40L水平可能是急性心肌梗死病变活动性标志物,有望成为预测心肌梗死及斑块稳定性与否的敏感指标,值得进一步的研究;应用他汀类药物调节 CD40L能否在未来治疗急性心肌梗死提供理论依据,还需要更深入的研究。

[1]Schonbeck U,Mach F,Sukhova GK,et al.Regulation of matrix metalloproteinase expression in human vascular smooth muscle cells by T-lymphocytes: A role for CD40 sig naling in plaque rupture[J].Circ Res,1997,81:448-454

[2]Mach F,Schonbeck U,Bounnefoy JY,et al.Activation of monocyte macrophage functions related to acute atheroma complication by ligation of CD40:Induction of collagenase stromelysin and tissue factor[J].Circulation,1997,96:396-399

[3]吴歆华,张华,付海清,等.急性冠脉综合征过氧化物酶体增生激活型受体γ与 CD40/CD40L表达的相关性研究 [J].海南医学,2007,18(01):43

[4]Ray K K,Cannon C P.Pathological changes in acute coronary syndromes:the role of statin therapy in the modulation of inflammation,endothelial function and coagulation[J].J Thromb Thrombolysis,2004,18(2):89-101

[5]Luo Y,Jiang D,Wen D,et al.Changes in serum interleukin-6 and high- sensitivity C- reactive protein levels in patients with acute coronary syndrome and their responses to simvastatin[J].Heart V essels,2004,19(6):257-262

[6]Naghavi M,Libby P,Falk E,et al.From v ulnerable plaque to vulnerable patient:a call for New definitions and risk assessment strategies:Part I[J].Circulation,2003,108(14):1664-1672

[7]Kochx M M,De-Meyer GR,Buyssens N,et al.Cell composition,replication,and apoptosis in atherosclerotic plaques after6months of cholesterol withdrawal[J].Circ Res,1998,83:378-387

[8]Sehonbeck U,Sukhova GK,Shimizu K,et al.Inhibition of CD40 signaling limits evolution of established atherosclerosis in mice[J].Proc Natl Acad Sci USA,2000,97(13):7458-7463

[9]严金川,吴宗贵,张玲珍,等.CD40配体高表达与壁稳定型心绞痛之间的关系 [J].中国动脉硬化杂志,2001,9(5):409-412

[10]Schonbeck U,Sukhov a GK,Shinmizu K,et al.Inhibition of CD40 signaling limits ev olution of established atherosclerosis in mice[J].Proc Natl Acad Sci USA,2000,97(13):7458-7463

[11]Schwartz G G,Lsson AG,Ezekowitz M D,et al.Effect of atorvastatin on early recurrent ischemic ev ent in acte coronary syndrome:The M IRACLE study a randomized controlled trial[J].JAM A,2001,1711-1718

[12]孟祥雁,高长斌.可溶性 CD40L与急性冠脉综合征的临床研究[J].中国实验诊断学,2010,(04):8-11

[13]Aukrust P,Muller F,Ueland T,et al.Enhanced levels of soluble and membrane-bound cd40 ligand in patients with unstable angina[J].Circulation,1999,100:614-620