沈建芬，张又枝，肖军花，王嘉陵

(1.浙江省嘉兴市第一医院，314000;2.华中科技大学同济医学院基础医学院药理系，武汉430030)

二苯乙烯苷(2，3，5，4＇-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside，THSG)是从何首乌中提取的活性成分，与人工合成的雌激素己烯雌酚(diethylstilbestrol，DES)及从法国红葡萄酒中提取的白藜芦醇(resveratrol，RES)具有相同的多羟基二苯乙烯结构。实验证实，DES和RES均可通过上调内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)的mRNA和蛋白的表达水平，增加一氧化氮(nitricoxide，NO)产量，产生舒张血管的作用[1-2]。笔者前期实验发现，THSG具有舒张血管作用，且与增加血管NO产量有关[3-4]。因此推测

THSG增加NO产量产生舒张血管的作用可能与影响eNOS基因表达水平有关。笔者在本实验中研究THSG对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)NO含量及eNOS活性的影响及其作用机制，以期从基因水平阐述THSG增加NO产量、舒张血管的作用机制，为THSG的开发利用提供理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料THSG(华中科技大学同济医学院药理系王嘉陵教授提供)，HUVECs(华中科技大学同济医学院细胞库提供)，胰酶(购自Sigma公司，批号:9002077)，NO试剂盒(硝酸还原酶法)及NOS分型试剂盒购于南京建成生物工程有限公司。达尔伯克改良必需基本培养基(Dulbecco＇s modified minimal essential mediun，DMEM)及胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)购于Gibco公司。RT-PCR试剂盒为TaKaRa公司。eNOS及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)引物合成为北京奥科公司。eNOS多克隆抗体及actin一抗购自Chemclo公司。

1.2 细胞培养及分组HUVECs用含10%FBS的DMEM培养液培养，3～4 d传代1次，取处于对数生长期细胞进行实验。实验组加入1，10，100 μmol·L－1THSG(用DMEM配制，过滤除菌)，对照组不加其他试剂，均用含2%FBS的DMEM培养液在二氧化碳(CO2)培养箱培养。每个实验组和对照组重复3次，取平均值。……