郑 浩，童光志

（中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241）

乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）属黄病毒科黄病毒属(Flavivirus)，同属成员还包括西尼罗河病毒(West Niles virus，WNV)、墨累谷脑炎病毒(Murray encephalitis virus，MVEV)、圣路易斯脑炎病毒(St.louis encephalitis virus，SLEV)、黄热病毒 (Yellow fever virus，YFV)、登革病毒(Dengue virus，DENV)和蜱传脑炎病毒(Tickborne encephalitis virus，TBEV)等。由于存在共同抗原，JEV与WNV、MVEV、SLEV构成黄病毒中的乙型脑炎血清群[1]。黄病毒属成员具有相同的基因组结构，对应基因编码蛋白具有相近功能[2]。

JEV基因组为单股正链RNA，长约11 kb，仅由单一开放阅读框翻译。表达的多聚蛋白在翻译中或翻译后裂解出3种结构蛋白（C、prM、E）和7种非结构蛋白（NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5）[2]。在JEV感染细胞中，可发现一个与NS1蛋白相关，但比NS1蛋白大的蛋白，称之为NS1'蛋白[3,4]。早期研究认为，NS1'蛋白是NS1蛋白C端在NS2A蛋白内裂解所形成的。Melian等[5]研究发现WNV可通过核糖体-1移码机制翻译出NS1′蛋白。本文根据病毒移码信号分析JEV基因组序列，并鉴定NS1'蛋白移码序列。

1 材料与方法

1.1 病毒与细胞 JEV HEN0701株分离自2007年河南地区流产猪胎儿，其基因组GenBank登录号为FJ495189[6,7]。Vero细胞以含10% FBS的DMEM培养液培养。

1.2 主要试剂和实验动物 抗JEV NS1单克隆抗体中国农业科学院哈尔宾兽医研究所华荣虹博士赠送；小量质粒提取纯化试剂盒和小量DNA片段快速回收试剂盒购自广东东胜生物技术公司；His-Bind Purification Kit为Merck产品；氟氏完全佐剂和氟氏不完全佐剂购自Sigma公司；Top10感受态细胞和BL-21感受态细胞购自天根生物技术公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒和Western及IP细胞裂解液均为碧云天产品；LATaqDNA polymerase为大连宝生物产品；昆明小鼠购自上海斯莱克实验动物有限公司；DMEM培养基、FCS均购自Gibco公司。

1.3 NS1′移码片段的……