赵 妍 ，孔聪聪，张晓敏，崔红玉 ，石星明 ，蒿莲薇 ，胡顺磊 ，闫 帅 ，薛 美，牛秀杰，李巧玲，王 玫，刘胜旺，王云峰

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室，哈尔滨 150001；

2.云南农业大学动物科学技术学院，昆明 650201)

鸡传染性喉气管炎（infectious laryngotracheitis,ILT）是由鸡传染性喉气管炎病毒（Infectious laryngotracheitis virus，ILTV）引起的一种急性、高度接触性呼吸道传染病。其特征是呼吸困难，咳嗽和咳出血样渗出物，气管中上部有黄色干酪样假膜，剖检可见喉头、气管黏膜肿胀、大面积出血，最终糜烂、坏死[1,2]。自1925年美国的May等首次报道该病以来，ILT在全世界广泛流行[3]。中国在20世纪50年代末期首次报道该病发生[4]，90年代开始有更多的报道[5-7]。2009年11月，江苏省某鸡场7周龄种鸡突然发生以呼吸困难为主要特征的疾病，剖检可见气管严重出血，经细菌学检查未见可疑致病菌，临床初步诊断为ILT。本研究采集病死鸡喉头气管组织进行了病毒的分离与鉴定。

1 材料与方法

1.1 病料与实验动物 病料采自江苏某养鸡场疑似感染ILT的病鸡喉头气管组织，9～11日龄SPF鸡胚、SPF鸡均由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供。

1.2 主要试剂和仪器 rTaqDNA聚合酶、pMD18-T载体、DL2000 DNA Marker购自宝生物工程(大连)有限公司；基因组DNA提取试剂盒购自Tiangen公司；质粒DNA小量提取试剂盒、胶回收试剂盒购自BioFlux公司；PCR仪购自Biorad公司；低温离心机购自Thermo公司。

1.3 病毒分离 将病鸡喉头气管组织剪碎、研磨，按1:5比例加入PBS溶液，反复冻融3次，离心取上清，加入青霉素-链霉素双抗（终浓度500 U/mL），4℃作用6 h后，以鸡胚绒毛尿囊膜（chick chorioallantoic membrane，CAM）接种法，将病毒液接种于10日龄SPF鸡胚，每胚0.2 mL，同时设有阴性对照。……