张哲雄，徐承来，曹永涛

（连云港市第二人民医院 检验科，江苏 连云港 222023）

高危型人乳头状病毒和IL-17在宫颈病变患者宫颈脱落细胞中表达的相关性和临床意义

张哲雄，徐承来，曹永涛

（连云港市第二人民医院 检验科，江苏 连云港 222023）

目的 探讨高危人乳头状病毒和白细胞介素17（interleukin，IL-17）在宫颈病变中的表达及临床意义。方法应用多重PCR技术和流式细胞技术对来我院就诊的66例妇女宫颈病变患者进行HPV-DNA、IL-17含量检测。结果HPV阴性患者29例、HPV阳性患者20例、宫颈癌患者17例。三组所表达的IL-17的含量分别为（2.37±2.03）%、（27.99±11.28）%、（35.4±11.59）%。HPV阳性患者、宫颈癌患者的IL-17的含量比 HPV阴性患者显著增高（P＜0.01），HPV阳性患者与宫颈癌患者之间无明显差别（P＞0.05）。结论IL-17与宫颈癌的发生发展相关，检测IL-17含量对宫颈癌诊断和病情变化有重要意义。

白细胞介素-17；宫颈癌；HPV-DNA

（ChinJLabDiagn，2012，16：0252）

宫颈癌，是最常见的高发恶性肿瘤之一，严重影响和威胁着妇女的健康。研究发现宫颈癌的发病与人乳头状瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染密切相关，许多肿瘤来源于炎症浸润，肿瘤发展与炎症反应导致周围组织浸润有关，因此联合检测宫颈病变炎症程度和HPV反映了宫颈癌发生的连续发展过程。

白细胞介素17（interleukin，IL-17）是一类主要由活化CD4＋记忆性T淋巴细胞分泌的具有促炎作用的细胞因子，在天然免疫和宿主防御中有特殊功能，在炎症反应中对细胞增殖分化、免疫调节及肿瘤生长方面发挥重要作用。本文通过检测宫颈脱落细胞中IL-17含量，研究IL-17的表达与宫颈疾病的相关性，深入了解IL-17在肿瘤发生发展过程中作用，为宫颈病变疾病的进一步筛查奠定基础。

1 对象与方法

1.1 对象

连云港市第二人民医院2009年5月至2010年11月妇科住院、门诊送检宫颈病变病人宫颈脱落细胞66例。年龄18－61岁，平均42岁。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 使用一次性宫颈细胞采集器，用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去，深入受检者宫颈口内2－3cm，顺时针旋转3-5圈。取出宫颈刷放入装有保存液的样本管中，将多余的刷柄折断，旋紧管盖，注明编号，立即送检。

1.2.2 仪器和主要试剂 美国BD公司流式细胞分析仪，配套BD公司IL-17PE试剂，DA7600扩增仪，港龙生物技术有限公司高危型人乳头瘤病毒多重核酸扩增荧光检测试剂。

1.2.3 流式标本的制备 取宫颈脱落细胞悬液200μl，分别加入荧光标记抗体IL-17 20μl，振荡混匀后室温避光孵育20min，用0.1mol／L pH 7.0 PBS×2ml，离心1 000rpm洗涤2遍，弃上清后，加入500μl的PBS混匀，悬浮细胞上机待测。

1.2.4 流式细胞术测定 流式细胞仪使用CELLQuest功能软件进行双参数获得数据分析，激光光源15mW氩离子激光，波长523nm，先用标准荧光微球对仪器作校对，使半峰变异系数在2%之内。以前向角散射光对侧向角散射点图确定淋巴细胞群，检测IL-17PE表达百分率，同期用同一患者标本不添加任何抗体作自身阴性对照。

1.2.5 多重PCR方法检测 HPV-DNA 取宫颈脱落细胞以13 000rpm离心5min，弃上清，加入50 μl DNA提取液，100℃干浴10min，再13 000rpm离心10min。取上清液扩增。PCR反应条件为50℃2min，95℃10min，1循环；95℃15s，52℃30 s，62℃60s，40循环。将临界阳性的Ct值设定为36，以仪器分析样本的Ct值，根据说明书提示方法判定结果。

1.3 统计学方法

2 结果

HPV阴性患者29例、HPV阳性患者20例、宫颈癌患者17例。三组所表达的IL-17的含量分别为（2.37±2.03）%、（27.99±11.28）%、（35.4±11.59）%。HPV阳性、宫颈癌患者的IL-17的含量比HPV阴性患者显著增高（P＜0.01）（如图1），HPV阳性患者与宫颈癌患者之间无明显差别（P＞0.05）。

3 讨论

IL-17是近年来发现的前炎症细胞因子家族成员，IL-17又称IL-17A，不同于Th1、Th2、Treg的细胞亚群，是由Th17细胞高水平分泌。IL-17可诱发涉及炎症的多种细胞因子和趋化因子的产生，具有重大的促炎作用，与多种自身免疫疾病和炎症性疾病有关。宫颈的人乳头瘤病毒（HPV）感染是宫颈癌的主要危险因素，至少有75%的女性会在一生中的某个时间感染HPV，根据HPV致病力的大小分为高危型和低危型两类。低危型多导致CINⅠ及扁平湿疣，高危型多导致CINⅡ、CINⅢ及宫颈癌。

图1 IL-17在宫颈病变患者脱落细胞中的表达

本实验结果显示IL-17在宫颈癌组和HPV阳性组表达增高。提示IL-17的高表达参与了宫颈癌的发生发展过程，与Numasaki等［1］发现IL-17具有促肿瘤血管生成的作用有关。也与IL-17虽然不直接促进血管内皮细胞生长，但可促进血管内皮细胞的迁移，明显上调由成纤维细胞或肿瘤细胞生成的前血管生成因子表达和IL-17通过刺激肿瘤细胞表达IL-6，诱导巨噬细胞募集及调节肿瘤细胞表型，使其生长快速一致［2］。

研究表明：实验中的高危HPV阳性组和宫颈癌组宫颈脱落细胞IL-17细胞百分比明显高于高危HPV阴性组。这与相关文献报道：IL-17可以诱导MMP-9的表达，并可增强JEG-3的侵袭能力［3］，促进生长因子，降解细胞外基质［4，5］，诱导肿瘤细胞凋亡耐受，促进肿瘤血管生成［3，4］，从而加速肿瘤生长、侵袭、转移，可能是其促肿瘤发展的机制之一。

IL-17A促进人宫颈癌细胞肿瘤原性（tumorgenicity），在肿瘤部位促进IL-6表达。它分泌TNF-α、IFN-γ及IL-2等致炎因子，可活化巨噬细胞，清除细胞内病原体，介导细胞免疫应答［6］。IL-17在蛋白质和mRNA水平可促进宫颈癌细胞株分泌IL-6和IL-8。IL-6可能参与宫颈癌发生发展，IL-6可刺激正常宫颈细胞、宫颈癌相关细胞株生长一致。也可能IL-17具直接促进宫颈癌细胞增殖作用，有相关研究将人类宫颈癌细胞移植到裸鼠体内发现，IL-17可促进人类宫颈癌细胞生长，且肿瘤体积明显增大。小鼠肿瘤模型中，IL-17可以促进血管形成，促进肿瘤的生长。研究发现在卵巢癌中IL-17有一定程度的表达，并且其表达同肿瘤的血管生成有关［7］。

因此IL-17在宫颈癌的诊断、治疗及预后判断有一定价值。而联合检测高危 HPV-DNA和IL-17，可提高宫颈癌尤其是早期病变的检出率，对宫颈癌的早期发现、早期诊断、早期治疗有重要意义。

［1］Numasaki M，Fukushi J，Ono M，et al.Interleukin 17gene transfection into murine fibrosarcoma cell line MCA increases tumorigenicity correlated with enhanced tumor microuascularity［J］.Blood，2003，101（7）：2620.

［2］巴 罗，刘亚峰.IL-17及其相关因子在呼吸道炎症疾病中的研究进展［J］.华西医学，2008，23（2）：401.

［3］Takahashi H，Numasaki M，Lotze MT.Interleukin-17enhances bFGF-，HGF-and VEGF-induced growth of vascular endothelial cells［J］.Immunol Lett，2005，98（2）：189.

［4］Hwang SY，Kim JY，Kim KW，et al.IL-17induces production of IL-6and IL-8in rheumatoid arthritis synovialfibroblasts via NF-kappaB-and PI3-kinase／Akt-dependent pathways［J］.Arthritis Res Ther，2004，6：R120.

［5］Fossiez F，Djossou O，Chomarat P，et al.T cell interleukin-17induces stromal cells to produce proinflammatory and hematopoietic cytokines［J］.J Exp Med，1996，183：2593.

［6］Park H，Li ZX，Zhang XO，et al.A distinct lineage of CD4＋T cells regulatestissue inflammation by producing interleukin 17［J］.Nat Immunol，2005，6（11）：1133.

［7］青文婕，吕 莎，侯倩男，等.白细胞介素-17在妇科肿瘤中的研究进展［J］.中华妇幼临床医学杂志，2010，6（5）：364.

Correlations between human papillomavirus testing and Interleukin-17in cervical exfoliated cells with cervical cancer and its clinical significonce

ZHANGZhe-xiong，XUCheng-lai，CAOYong-tao.（TheSecondHospitalofLianyungang，Lianyungang222023，China）

ObjectiveTo investigate the correlations between of high-risk human papillomavirus-DNA and interleukin（IL）-17their clinical implications.MethodsPeripheral blood was obtained from 66women in our cervical out-patient clinic.Real-time RT-PCR to measure the DNA expressions of HPV.Flow cytometric analysis（FCM）was performed to detect the percentage of IL-17cells.ResultsThe negative HPV DNA patients were 29cases The positive HPV DNA patients were 20cases cervical cancer patients were 17cases.expressions of IL-17were（2.37±2.03）%、（27.99±11.28）%、（35.4±11.59）%。Patients with HPV（＋）and cervical cancer showed a significant increase in the percentage of IL-17cells.No significant difference was observed in the percentage of IL-17patients with HPV（＋）and cervical cancer.ConclusionThe expression of IL-17might play an important role in human cervical cancerl，it might be used to evaluate tumor malignancy and prognosis of cerviacal careinoma.

IL-17；cervical cancer；HPV-DNA

R737.33

A

1007－4287（2012）02－0252－03

2011－01－14）