潘宏升，荀凤娇，田素飞，年 华，褚云卓＊

（1.中国医科大学附属第一医院 检 验科，辽宁 沈 阳110001；2.辽宁省第三人民医院 检 验科）

目前，全球范围内由社区相关性耐甲氧西林金黄色 葡 萄 球 菌 （community－associated methicillinresistant Staphylococcus aureus，CA－MRSA）引起的感染呈逐年上升趋势，CA－MRSA与医院相关性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（hospital－associated methicillin－resistant Staphylococcus aureus ，HAMRSA）存在许多不同，CA－MRSA多感染无相关危险因素的健康人群，且发病年龄较轻［1］。研究发现，HA－MRSA与CA－MRSA的mec A基因的葡萄球菌基因盒（staphylococcal cassette chromosome mec，SCCmec）的基因型不同，HA－MRSA 多为Ⅰ－Ⅲ，CA－MRSA以Ⅳ、Ⅴ型为主［1］。本文应用SCC－mec基因分型、SPA分型、多位点序列（MLST）分析等方法，从多个角度了解CA－MRSA的分子生物学特点，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源 收集2007年1月至2008年9月门诊及住院患者连续分离、不重复非痰标本CAMRSA菌株5例，其中浓汁3份，血液2份，详细情况见表1。

1.1.2 主要试剂及仪器 细菌基因组提取试剂盒，博日生物技术有限公司；Tag酶及PCR相关试剂，宝泰克大连生物科技有限公司；PCR引物，上海生工有限公司合成；脉冲场凝胶电泳试剂，美国Bio－Rad生物科技有限公司；PCR9700（Gene Amp）；脉冲场凝胶电泳仪（美国Bio－Rad），HZQ－F160振荡培养箱（上海）；超速低温离心机（贝克曼）；紫外凝胶成像仪（美国Alpha Innotech）。

表1 5株CA－MRSA菌株来源的基本情况

1.2 方法

1.2.1 DNA模板提取 采用细菌基因组提取试剂盒，按照说明提取基因组DNA。

1.2.2 SCCmec基因分型 引物设计及反应参数等参 照 文 献［2］进 行，ClassB 上 游 引 物：5’－TATTTTTGGGTTTCACTCGG－3’，下游引物：5’－CTCCACGTTAATTCCATTAATACC－3’；ClassC上 游 引 物：5’－GAACATTGTTACTTAAATGAGCG－3’，下 游 引 物：5’－TGAAAGTTGTACCCTTGACACC－3’；Type2上游引物：5’－ATTGCCTTGATAATAGCCTCT－3’，下游：5’－TAA AGGCATCAATGCACAAACACT－3’。

1.2.3 基因序列分析 目的基因经PCR扩增阳性，片段大小与预计值相符，产物经上海生工有限公司纯化、测序，在GenBank比对确证，其中SPA分型的测 序 结 果 于 数 据 库 （http：／／www.ridom.de／spaserver／）中公布的重复序列进行比较，根据排列方式及次数确定型别。……