庞有旺 郑季南 洪庆南 方 钧

（解放军泉州第180医院骨科，泉州 362000）

近年来已经证明的囊泡膜谷氨酸转运体有三种亚型［1～3］。其中Ⅰ、Ⅱ型囊泡膜谷氨酸转运体广泛、互补地分布于大脑皮质、丘脑、延髓和脊髓等中枢神经系统的谷氨酸能神经终末内［3～5］。目前已经把Ⅰ、Ⅱ型囊泡膜谷氨酸转运体作为谷氨酸能轴突终末的特异性标识物。生理学研究表明谷氨酸是作用三叉神经运动核神经元的主要神经递质，参与咀嚼、吮吸等活动［6～7］，但有关谷氨酸阳性终末在三叉神经运动核的分布模式到目前未见报道。因此，本研究综合应用束路追踪与免疫荧光组织化学相结合技术，对Ⅰ、Ⅱ型囊泡膜谷氨酸转运体阳性纤维在大鼠三叉神经运动核内的分布进行了研究。

材料和方法

1.Ⅰ、Ⅱ型囊泡膜谷氨酸转运体和神经元核蛋白免疫荧光组织化学染色

雄性SD大鼠6只，体重250－280g。戊巴比妥钠腹膜腔麻醉（40mg/kg）后，戊巴比妥钠深麻下，插管至升主动脉，先以100ml 0.025mol/L的PBS冲洗血液，再用500ml含4%多聚甲醛和75%饱和苦味酸的0.1mol/L的PB灌注固定，持续30min以上。灌毕立即取脑，并置入上述新鲜固定液中后固定4－6h，然后再移脑入含30%蔗糖的0.1mol/L的PB（pH 7.3）中，至其沉底。冰冻切片机行冠状切片，片厚25μm，分为2套收集。

第1套切片用于Ⅰ、Ⅱ型囊泡膜谷氨酸转运体和神经元核蛋白免疫荧光三重染色。具体步骤如下：①小鼠抗神经元核蛋白IgG（1∶1000；MAB377；Chemicon）和兔抗Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体IgG（0.8μg/ml，日本京都大学金子武嗣先生惠赠）和豚鼠抗Ⅱ型囊泡膜谷氨酸转运体IgG（0.8 μg/ml，日本京都大学金子武嗣先生惠赠）的混合液室温下孵育过夜；……