低氧环境下肺腺癌A549细胞自噬及m iR-155表达变化的研究

2012-08-09徐丽瑶钟小军符碧琪李丽芳蔡阿桥

实用临床医学 2012年10期

关键词：水平

徐丽瑶，李勇，钟小军，符碧琪，李丽芳，蔡阿桥

（南昌大学第一附属医院肿瘤科，南昌330006）

细胞自噬是一种依赖溶酶体的降解途径，它对维持细胞生长、分化及内环境稳态发挥重要作用。肿瘤细胞可通过自噬缓解代谢压力，克服营养缺乏和低氧环境得以生存。低氧时肺腺癌A549细胞自噬活性增强，但其具体调控机制尚未明确。microRNA作为一种转录后调节机制，在多个生物学过程中发挥作用。新近研究表明：microRNA可通过沉默自噬信号通路上的关键蛋白，参与自噬多个环节的调控[1]，但microRNA可否作用于低氧诱导A549细胞自噬过程尚未见报道。本研究通过观察体外常氧和低氧培养环境下人肺腺癌A549细胞miR-155，自噬标记蛋白LC3及自噬体变化，为探讨miR-155与自噬关系的研究打下一定的基础。

1 材料与方法

1.1 材料

人肺腺癌A549细胞（中国科学院上海细胞库）；RPMI-1640培养基、胎牛血清（美国Hyclone公司）；胰酶（北京索莱宝科技有限公司）；蛋白提取试剂盒（美国Pierce公司）；PCR仪（美国 ABI公司）；引物（大连 Takara 公司）；Trizol、SYBR-GREEN Real-Time试剂盒（美国Invitrogen公司）；三气培养箱（日本SANYO公司）；蛋白电泳仪、电转仪（美国Bio-Rad公司）。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养

人肺腺癌A549细胞用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基于37℃，5%CO2/95%空气（常氧）饱和湿度培养箱常规传代培养。取生长状态良好的A549细胞经0.25%胰酶消化后，根据后续实验的不同，分别接种于60 mm培养皿、6孔板及96孔板中培养12 h。更换新鲜培养基后置于37℃，1%O2/5%CO2/94%N2三气培养箱中，继续后续实验。

1.2.2 实验分组

分别在常氧（20%O2/5%CO2/75%N2）（常氧组）及低氧（1%O2/5%CO2/94%N2）（低氧组）环境下培养A549细胞。