王正春，蒋海艳，杨笑笑，李月文，李继晖，郑凌凌

（1.重庆市林业科学研究院，重庆 400036；2.西南大学资源环境学院，重庆 400715；3.彭水自治县林业科技推广站，四川 彭水 409600）

牛肝菌属是担子菌亚门（Basidiomycotina）、层菌纲（Hymenomycete）、 伞菌目（Agaricales）、 牛肝菌科（Boletaceae）的一类珍稀大型菌根食用真菌。重庆生长的牛肝菌以彭水 “大脚菌”即美味牛肝菌最有名气，味道鲜美，营养丰富，具有高经济价值。市场上消费的美味牛肝菌主要是野生，目前尚未见人工栽培的报道。近年来，由于人们过度采集及不合理采集，野生资源正逐年减少，为使这一宝贵资源得到可持续利用，对其采取保护措施和人工驯化繁育势在必行。通过对重庆武陵山区彭水野生美味牛肝菌菌丝的分离培养，为美味牛肝菌的菌根菌合成和人工驯化作好基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 分离材料

白牛肝菌，菌盖淡褐色，菌褶白色，菌柄粗壮，淡黄色；黄牛肝菌，菌盖为黄褐色，菌柄为烤面包的皮壳色。2种子实体，于2011年6月18日采摘于重庆武陵山彭水朗溪乡青冈纯林内，海拔为700 m左右。2种牛肝菌的子实体情况见图1。

图1 2种牛肝菌的子实体情况

1.1.2 培养基

固体培养基：①葡萄糖 20 g、酵母粉 7.0 g、黄豆粉3.0 g、 KH2PO41.0 g、 MgSO4·H2O 0.5 g、 MgSO4·7H2O 0.5 g、琼脂 20.0 g，水 1000 mL[1]；②马铃薯 200 g、葡萄糖20 g、 KH2PO43 g、 MgSO4·7H2O 1.5 g、 琼脂 20 g、 VB110 mg，水 1000 mL。

液体培养基：③葡萄糖 20 g、麦芽糖5 g、KH2PO41 g、 MgSO4·7H2O 0.5 g、 VB11 mL，水 1000 mL，pH 6.0；④葡萄糖 20 g、 酵母浸出膏 7.0 g、MgSO4·7H2O 1.0 g、KH2PO42.0 g、 VB10.01 mg，水 1000 mL，pH 5.2～5.8[2]。

1.2 方法

1.2.1 菌丝分离、培养

采摘的子实体放入干净、透气的盒子，立即带回实验室进行处理。选取新鲜幼嫩、无病虫害的完整子实体，采用组织分离法，无菌操作，及时进行分离。子实体表面用75%酒精进行消毒，然后切取菌柄与菌盖交界处[3]大小为(0.2×0.2)cm～(0.4×0.4)cm的组织块接入培养基中，分别做好标记，并注明日期，放入恒温恒湿培养箱中进行培养。……