高效液相色谱法测定耳聋丸中栀子苷和黄芩苷含量

2012-08-06李延雪邵礼梅王云龙苏玉娟

中国药业 2012年3期

李延雪，邵礼梅，王云龙，苏玉娟

(黑龙江省鸡西市药品检验所，黑龙江鸡西 158100)

耳聋丸是由黄芩、栀子、龙胆、地黄、泽泻、木通、当归等十味中药经适宜加工方法制成的中成药，收载于2010年版《中国药典(一部)》[1]，具有清肝泻火、利湿通窍的功效，临床用于肝胆湿热所致的头晕头痛、耳聋耳鸣、耳内流脓。文献报道[2－7]的大多都是测定耳聋丸中黄芩苷的含量。笔者建立了可同时测定黄芩苷和栀子苷含量的方法。

1 仪器与试药

岛津LC－2010A型高效液相色谱仪，AG285型电子分析天平，KQ－400KDE型超声波清洗器，岛津UV－2550型紫外分光光度计。栀子苷对照品(批号为110749－200613)、黄芩苷对照品(批号为110715－201016，含量为94.0%)，均由中国药品生物制品检定所提供;耳聋丸(批号为101102，100807，101205);水为纯化水，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Extend － C18柱(250 mm ×4.6 min，5 μm);流动相:A为0.5%冰醋酸溶液，B为甲醇，梯度洗脱，时间程序见表 1;流速:0.8 mL/min;柱温:室温;进样量:10 μL;检测波长:240 nm。理论板数按栀子苷峰计算不低于10 000。栀子苷和黄芩苷与相邻杂质峰之间的分离度均大于 1.5。

表1 流动相梯度洗脱时间程序

2.2 溶液制备

精密称取栀子苷和黄芩苷对照品适量，加50%甲醇制成每1 mL中含栀子苷对照品0.027 2 mg和黄芩苷对照品0.156 8 mg的混合溶液，即得对照品溶液。取耳聋丸，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率400 W，频率40 kHz)30 min，取出，放冷，再称定质量，用50%甲醇补足减失质量，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方量并以相同工艺制备不含栀子和黄芩的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:取2.2项下3种溶液，按2.1项下色谱条件测定。结果阴性对照品溶液色谱图中，在栀子苷和黄芩苷色谱峰相应位置上无干扰峰出现，表明阴性样品的其他组分对栀子苷和黄芩苷的测定无干扰(图1)。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取含栀子苷和黄芩苷对照品的混合溶液 2，5，10，15，20 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，以对照品进样量为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)进行回归分析，栀子苷回归方程 Y=2.085×106X －6.064 1×102，r=0.999 7(n=5);黄芩苷回归方程 Y=5.757 6×105X－1.376 7×103，r=1.000 0(n=5)。结果表明，栀子苷进样量在0.054 4～0.544 0 μg范围内，黄芩苷进样量在0.313 6～3.136 0 μg范围内均与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10 μL，连续进样5次。以峰面积计算，栀子苷的 RSD=1.50%(n=5)，黄芩苷的RSD=0.32%(n=5)，表明仪器精密度良好。

重现性试验:取同一批样品(批号为101102)，依法制备6份供试品溶液并测定含量。结果栀子苷的峰面积 RSD=0.98%(n=6)，黄芩苷的峰面积 RSD=0.34(n=6)，表明方法重现性良好。

稳定性试验:取同一份供试品溶液(批号为101102)，分别于配制后 0，2，4，6，8，12，24 h 依法测定。结果栀子苷峰面积的RSD=1.12%(n=7)，黄芩苷峰面积的 RSD=0.76%(n=7)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验:称取已知含量的同批样品(批号为101102，栀子苷含量为2.35 mg/g，黄芩苷含量为15.94 mg/g)6份，每份约0.25 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，以两份为一组，共3组，每组分别精密加入栀子苷 0.412 5，0.585 0，0.732 5 μg，黄芩苷2.922 5，3.990 0，5.297 5 μg，按供试品溶液的制备方法制备以及上述色谱条件测定，计算回收率。结果见表2。