童永清 郑红云 李 锋 顾 剑 李 艳，＃

童永清1，2，郑红云2，李 锋2，顾 剑1，李 艳1，2，＊

武汉大学人民医院，武汉430060，1检验科； 2临床分子诊断中心； ＊通讯作者

酪氨酸激酶JAK2（Janus Tyr osine Kinase 2，JAK2）为非受体型即细胞内激酶，是JAK2基因编码的一种能调节红细胞生成的蛋白质，与JAK1、JAK3和 TYK2同属于JAK 家族［1］。研究发现，V617F突变位于JAK2的JH2假激酶区，该区域与JAK2活性的抑制有关。V617F突变时导致JAK2持续激活，从而导致不受控制的细胞持续增殖而引起骨髓细胞增多而导致骨髓增殖性疾病（Myeloprolif erative Diseases，MPD）的发生［2，3］。

MPD包括真性红细胞增多症（PV）、特发性骨髓纤维化（IMF）、原发性血小板增多症（ET）。WHO于2008年将JAK2基因V617F突变列为MPD的主要确诊指标之一［4］，同时JAK2基因V617F突变检测也是监测临床治疗疗效的分子靶标［5］。因此检测或监测 MPD患者JAK2基因V617F突变是十分重要的。本研究建立一种基于锁核 酸 PCR（Locked Nucleic Acid PCR，LNA PCR）方法检测JAK2基因 V617F突变，并探讨其临床应用价值。

1 材料与方法

1.1 样品

收集2010年5月～2011年10月在本院血液科确诊住院的68例MPD患者的EDTA抗凝外周血或骨髓标本2～3 ml。患者平均年龄27.3±9.1岁，男43例，女25例。其中PV 37例、ET 22例、IMF 9例。以上患者均符合WHO骨髓增生异常／骨髓增生性疾病的诊断标准［4］。

1.2 实验试剂及仪器

人基因组DNA提取试剂盒（Bl ood ＆Cell Culture DNA Mini Kit）由凯杰生物技术有限公司（深圳）提供（货号：13323）；DNA PCR扩增试剂（2×Taq PCR Master Mix）由上海莱枫生物技术有限公司提供（货号：PT102－02）；DNA 测序试剂盒（The Big Dye Ter minator v3.1 Cycle Sequencing Kit）由Life Technologies公司提供（货号：4337456）；DNA Mar ker由上海莱枫生物技术有限公司提供（货号：PM101－02）。ND－2000超微量核酸蛋白测定仪（美国Nano Drop公司生产）；9700 PCR扩增仪（Life Technologies公司生产）；DNA凝胶电泳仪（北京六一仪器厂生产）；DNA测序仪（Life Technol ogies公司生产）；凝胶成像系统（法国VL公司生产）。

1.3 检测方……

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