王德国，王 新，刘 玉，王 星，邢 文，李祥东，杨 胜，王安才，孙贤林

(1.皖南医学院附属弋矶山医院老年心血管科，安徽芜湖 241001;2.安徽省立医院心脏科，安徽合肥 230001)

心肌细胞间缝隙连接(gap junction，GJ)是电冲动的快速传导通路，主要分布在心肌细胞端－端连接处。当心肌缺血时，Cx43表达降低、向心肌细胞侧边分布，严重影响电传导，是心律失常发生的主要机制之一［1］。最近，Shaw 等［2］发现微管系统是细胞Cx43快速运输并装配到闰盘部位的结构基础，在心肌缺血或者氧化应激时，导致Cx43在细胞侧边分布和无序分布，细胞间电传导相应减慢［3］。Taxol作为一种微管稳定剂，可促进缺氧状态下微管的聚合［4－5］。本实验旨在观察微管稳定剂Taxol是否参与心肌缺血损伤的导致的Cx43重构，探讨稳定剂Taxol能否作为新的抗心律失常药物。

1 材料与方法

1.1 主要仪器和试剂 AnaeroPack安宁包厌氧培养袋中(日本三菱公司)，Langendorff灌注装置(南京美易科技有限公司)，电泳槽及电泳仪(美国BIORAD公司)，共聚焦显微镜(德国Zeiss);Taxol购自于Sigma公司，兔抗鼠Cx43抗体(Abcam公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组 将分离的大鼠心肌细胞随机分为8组，以台盼蓝染色法测定细胞存活率。(1)对照组:细胞静置120 min;(2)缺氧组:心肌细胞低氧120 min;(3)Taxol干预组:在缺氧前给予不同浓度的 Taxol(0.1、1 、10、100、1、10 nmol·L－1)，其余同缺氧组。

1.2.2 用酶解法分离大鼠心室肌细胞［6］大鼠断颈处死后取出心脏，4℃氧饱和Tyrode液洗净血液，Langendorff恒流灌流(37℃)，流速10 ml·min－1，并以纯O2饱和。无钙Tyrode液灌流5 min后再以I型胶原酶0.3 g·L－1的无钙 Tyrode液灌流消化10 min。随之将心室肌剪碎，于含0.1%BSA的无钙Tyrode液中37℃孵育15 min，细胞悬液用200 μm的尼龙网过滤，滤液在无钙Tyrode液中逐步复钙至Ca2+浓度为1.25 mmol·L－1。……