陈 思，李 辉，马娇颖，谢光蓉，陈建华

(中国药科大学生命科学与技术学院分子生物学教研室，江苏 南京 210009)

尿酸酶(Uricase，EC 1.7.3.3)是一种以氧作为受体的氧化酶，能够催化尿酸氧化生成尿囊素、CO2和H2O2。大多数哺乳动物和禽类体内含有尿酸酶，可将核酸组成单位中嘌呤核苷酸代谢的产物尿酸分解成尿囊素，而人和猿类体内缺乏尿酸酶，所以以尿酸形式直接排出体外。尿酸及其盐类在水中溶解度很低，在某些病理情况下，由于嘌呤代谢紊乱，血液中尿酸积累过多，会导致高尿酸血症，继而引发痛风综合症。尿酸酶可以将尿酸氧化成尿囊素，从而降低痛风病人体内的尿酸水平，进而消除痛风病人痛风性关节炎、痛风石沉积及尿酸肾结石形成等症状[1]。

目前测定尿酸酶活性的方法主要是紫外分光光度法，该方法虽操作方便，但存在检测线性范围窄、测量结果易受反应体系杂质的干扰等不足。作者在文献[2]的基础上，对其进行改进，建立了HPLC法测定猪尿酸酶粗酶液活性，为尿酸酶活性研究奠定了基础。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

重组猪尿酸酶基因工程菌，自行构建。

甲醇，色谱纯；硼酸、硼砂、高氯酸、磷酸，分析纯；尿酸，化学纯，美国Fisher Scientific Co.。

高效液相色谱仪，岛津；离心机；细胞破碎仪；UV1100型紫外分光光度计；万分之一天平；pH计；10 kD超滤管，美国Millipore公司。

1.2 方法

1.2.1 溶液配制

硼酸-硼砂缓冲溶液：称取硼砂4.2908 g、硼酸3.4018 g，定容于500 mL容量瓶中，调pH值至8.4。

终止液：取1 mL 75% 的高氯酸溶液加至10.6 mL去离子水中，终浓度为1 mol·L-1。

尿酸标准溶液：精密称取0.0168 g尿酸于100 mL容量瓶中，用缓冲溶液定容，终浓度为1 mmol·L-1。……