王斌斌，刘逸寒，李 玉，王建玲，路福平

(工业发酵微生物教育部重点实验室(天津科技大学) 工业酶国家工程实验室 天津市工业微生物重点实验室 天津科技大学生物工程学院,天津 300457)

β-葡萄糖苷酶(beta-Glucosedase，EC 3.2.1.21)是纤维素降解酶系的主要组分之一，它能够水解结合于末端非还原性的β-D-葡萄糖苷键，同时释放出β-D-葡萄糖和相应的配基[1]，在人类、动物、植物和微生物的糖类代谢方面都具有重要的价值[2]。目前，β-葡萄糖苷酶已经广泛应用于食品、酿酒、医药、化工及粮食加工等领域，可用于改善茶叶、果汁的风味[3]，生产低聚龙胆糖[1]、大豆异黄酮活性苷元[4]和天然抗氧化剂多酚化合物[5]等。

虽然植物中广泛存在着β-葡萄糖苷酶，但其含量少、活力低、大规模生产β-葡萄糖苷酶纯化工艺较为复杂，限制了其扩大应用。因此，通过基因重组技术构建工程菌，分泌表达高活性β-葡萄糖苷酶对其实现工业化具有重要意义。Raynal等[6]于1984年从脆壁克鲁维酵母中克隆得到β-葡萄糖苷酶基因，并在大肠杆菌和酿酒酵母中表达，重组菌产酶活力分别达到570 U·mL-1和3660 U·mL-1。2007年Hong等[7]在毕赤酵母中对嗜热子囊菌β-葡萄糖苷酶进行表达，酶活力为0.7 U·mL-1。2009年李丽娟[8]实现黑曲霉GS115β-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中表达，酶活达到1218 U·mL-1，是出发菌株的33.6倍。迄今为止，已有多种微生物来源的β-葡萄糖苷酶基因被克隆获得并实现异源表达及分泌，但β-葡萄糖苷酶生产菌的相关研究绝大部分集中于真菌[9]，而对于细菌β-葡萄糖苷酶鲜有研究。随着β-葡萄……