徐晓婷 李金利 秦颂兵 周菊英

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是我国常见的恶性肿瘤之一，放疗是目前根治鼻咽癌的公认和有效的手段。20余年来，随着鼻咽癌影像学、放疗技术及设备研发的进展，鼻咽癌早期的局部控制率可达70%~90%，但晚期（Ⅲ、Ⅳ期）仅为50%，5年总生存率（OS）仅40%~70%[1]。因此，如何提高鼻咽癌放射治疗的敏感性始终是该领域的研究热点。20世纪70年代，Folkman[2]首次提出通过抑制血管生长、切断营养供给而达到抑制并消除肿瘤的设想。重组人血管内皮抑制素注射液（商品名：恩度）是在内皮抑素的结构基础上，在母体的N端添加了9个氨基酸残基序列，较内皮抑素对蛋白酶、酸、热的稳定性更佳[3]。本研究旨在研究恩度联合放疗对鼻咽癌的抑制作用及其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株和裸鼠 人鼻咽癌细胞株CNE1购于中国科学院上海细胞研究所，BALB/c（nu/nu）裸鼠24只，雌性，4周龄，体质量15~18 g，购于中国科学院上海动物中心[动物合格证号：SCXK（沪）2008-0005]，苏州大学动物中心SPF级条件下统一饲养。

1.1.2 药品与试剂 RPMI-1640培养基和胰蛋白酶（美国GIBCO公司），小牛血清（杭州四季青公司）；恩度注射液（南京先声药业有限公司）；Trizol（美国Invitrogen公司）；MMLV（Promega公司）；DEPC（BBI公司）；Ex TaqTMR-PCR Version 2.1（大连宝生物公司，DRR031）；血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、Survivin和6对随机引物（上海生工生物公司）。

1.1.3 主要仪器 CO2培养箱（上海HERAEUS BB5060型）；倒置显微镜（日本OLYMPUS CK-2型）；ABI 9600低温高速离心机（德国Heraeus公司）。

1.2 方法

1.2.1 建立鼻咽癌裸鼠成瘤模型 在CNE1细胞处于指数生长期，细胞总量充足，以0.25%胰蛋白酶将细胞消化后，调整细胞浓度至2.5×107个/mL，按0.2 mL/只推注入裸鼠右后肢腹股沟皮下。……