冯爱强 李蕾蕾 张彦武 胡花丽 王 举

细胞周期抑制蛋白（p27kip1）和S期激酶相关蛋白酶2（Skp2）是近年来发现的2个重要信号传导分子，参与调控细胞增殖和凋亡，与肿瘤发生发展密切相关[1]。但其在乳腺癌发生发展中的研究少见报道。本研究对40例乳腺癌组织中Skp2、p27kip1 mRNA进行检测，并分析其与临床病理因素的关系，报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选择2009年10月—2011年5月于本科治疗的乳腺癌患者40例，年龄23~67岁，平均年龄（50.18±12.65）岁。病理类型均为浸润性导管癌，病理分期及组织学分级按WHO分期及分级标准，另取乳腺纤维腺瘤标本20例，以同期正常乳腺组织标本（取癌灶边缘5 cm以上经病理学检查的正常乳腺组织）20例作为对照。所有组织标本均经病理学证实，而且术前均未接受放疗、化疗及内分泌等治疗。

1.2 方法

1.2.1 标本收集与处理 将新鲜组织标本1.5 g置于1.5 mL DEPC处理过的EP管中，立即置于-80℃冰箱备用。

1.2.2 半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR） 乳腺癌组织、乳腺纤维腺瘤组织、正常乳腺组织均按Trizol一步法提取组织中的总RNA，用紫外分光光度计测定RNA样品的OD260/OD280值，观察提取RNA样品的纯度并计算其含量。参照文献[2]设计PCR引物，Skp2引物序列：上游5′-ATGTGACTGGTCG GTTGC-3′，下游5′-TCGATAGGTCCATGTGCT-3′，扩增产物片段长度120 bp；p27kip1引物序列：上游5′-AGCTTGCCC GAGTTCTACTA-3′，下游5′-GCTTCTTGGGCGTCTGCT-3′，扩增产物片段长度325 bp。以葡萄糖醛酸脱氢酶（GAPDH）为内参照，引物序列：上游5′-AACGGATTTGGTCGTATTG-3′，下游5′-CACAGTCTTCTGGTGGC-3′，扩增产物片段长度为540 bp。RT参照试剂盒（Takara公司）说明书操作，反应体系为10 mL，RNA模板量为1 μL，反应条件：30℃水浴10 min，42℃水浴30 min，99℃水浴5 min，5℃水浴5 min。PCR反应条件为94℃预变性2 min，94℃变性30 s，64℃复性30 s，72℃延伸1 min，35个循环，72℃延伸10 min。-80℃冰箱保存备用。将5 μL PCR产物于2%琼脂糖凝胶（0.5 mg/L）溴化乙锭染色上电泳，紫外灯下观察成像。……