张玉红，李建斌，单 泓

(河南省红十字血液中心成分室 河南郑州 450012)

目前临床应用血小板主要有机采血小板，国内多用CS 3 000plus血细胞分离机，单采血小板具有浓度高、纯度高、临床输注疗效好、白细胞污染少、不良反应少等优点［1，4］，但也有采集时间长(50 ～70 min)、成本高、献血者招募困难等缺点。而手工浓缩血小板具有资源丰富、成本低廉等优点，在欧美国家，手工血小板的临床使用占所有血小板种类的40% ～50%［2，5］。手工血小板的临床应用意义深远，河南省红十字血液中心自2006年来积极开展全血手工分离制备浓缩血小板的工作，现具体报告如下。

1 材料与方法

1.1 主要材料及仪器 大容量低温离心机、热合机、KX-21型血小板计数仪、恒温血小板震荡仪，分浆夹等。

1.2 血液采集 多联袋采集新鲜全血。献血前72 h内未服用过阿斯匹林类药物，外周血小板计数≥150×109/L，采血顺畅，规格分别为200 ml和 400 ml，要求在采血后6 h内，无乳糜、无凝块、无溶血等。

1.3 血小板制备 富浆法制备浓缩血小板，将新鲜全血平衡后，置于大容量离心机，离心温度设置在22℃，第1次离心采用转速为2 000 r/min，时间为7 min，离心后，从离心机内小心取出全血，避免震荡，分别使用分浆夹式分离法和悬挂式虹吸分离法，制备富含血小板血浆和红细胞。热合分离红细胞袋后，将留下的富含血小板血浆的两联袋平衡后再次离心，离心条件为22℃、2 800 r/min、12 min，制成血小板浓缩液和贫血小板血浆。分别取样，检测不同规格全血、不同离心条件及不同分离方法对血小板回收数量的影响。

1.4 统计学分析 实验各项参数用表示，采用单组数据的t检验，用SPSS统计软件录入数据，进行统计学处理。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 不同规格全血制备浓缩血小板的质控结果 200 ml全血制备血小板，平均每袋血小板计数低于国家标准(≥2.0 ×1010/袋)，利用 400 ml全血制备的浓缩血小板，平均每袋计数均达到了国家标准(≥4.0×1010/袋)。两种规格(200 ml和400 ml)全血制备的浓缩血小板，其中红细胞和白细胞残余量均符合国家标准要求。具体质控结果见表1。

表1 不同规格全血制备浓缩血小板质量控制结果(±s)

表1 不同规格全血制备浓缩血小板质量控制结果(±s)

血袋规格(ml)袋数(n)国家标准( ×1010/袋)质控结果血小板计数( ×1010/袋)残余白细胞(×108/袋)残余红细胞( ×108/袋)200 30 ≥4.0 6.07 ±0.86 3.94 ±0.73 2.14 ±0.35 2.0 1.36 ±0.48 2.02 ±0.27 1.26 ±0.32 400 30 ≥

2.2 不同离心条件制备浓缩血小板的质控结果 离心条件为速度2 000 r/min、时间7 min、温度22℃、降速7 r/min时所获得的血小板数量相对较高，具体质控结果如表2。

表2 不同离心条件制备浓缩血小板的质控结果(±s)

表2 不同离心条件制备浓缩血小板的质控结果(±s)

*P ＜0.01。

规格(ml)袋数n第1次离心条件转速(r/min)时间(min)温度(℃)次离心条件转速(r/min)时间(min)温度(℃)第2血小板含量( ×1010/袋)400 30 2000 7 22 2800 12 22 6.26 ±0.54 400 30 1630 7 22 2800 12 22 4.24 ±0.93

2.3 不同分离方法制备浓缩血小板的质控结果 分浆夹式和悬挂式分离手工制备浓缩血小板，分浆夹式分离法获得的血小板数量显著高于悬挂式分离法(P＜0.05)，前者分离法制备的浓缩血小板中混入的红细胞、白细胞明显低于悬挂式分离。质控结果见表3。

表3 悬挂式及分浆夹式分离方法制备手工血小板的质控结果对比(±s)

表3 悬挂式及分浆夹式分离方法制备手工血小板的质控结果对比(±s)

血小板计数 白细胞残留量红细胞残留量分浆夹式组别 n 30 6.12 ±0.92 0.38 ±0.27 1.44 ±0.51悬挂式30 5.24 ±0.89 1.23 ±0.48 1.79 ±0.54

3 讨论

富浆法制备浓缩血小板是把6 h内采集的全血先轻离心制备富血小板血浆(RPR)，再将RPR重离心，移去上层血浆，下层沉淀即为浓缩血小板。该方法制备浓缩血小板，为20世纪80年代手工血小板分离制备的标准方法。利用富浆法手工制备浓缩血小板的收集率应大于70%［3］。但在工作中，手工血小板的收集率及质量可以受多种因素影响［6］，如制备血小板原料全血采集的时间、血袋内壁的光滑度、全血采集时的一针率、全血运输及贮存条件、离心条件等。

在实践中，不断摸索总结经验，发现利用400 ml全血制备的浓缩血小板，平均每袋计数优于200 ml全血，这可能因为富浆法制备浓缩血小板，第一次离心是轻离心，离心后，200 ml全血分离界面相对较小，从离心机内取出到分离的过程中，界面容易破坏，导致分离出的富血小板血浆容量较少，同时富血小板血浆中有大量血小板粘附在血袋内壁，结果导致血小板收集率较低。而400 ml全血制备血小板时，尽管有相同因素存在，但由于体积较大，分离界面清晰，分离出的富血小板血浆容量较多，因而血小板的收集率相对较高。利用400 ml全血制备的浓缩血小板数量均达到了国家标准。

手工浓缩血小板的质量及收集率还与离心条件有关，离心力的大小、离心时间的长短、离心温度以及刹车速度等均可能影响血小板的质量及收集率。选择合适的离心条件对制备浓缩血小板至关重要。如果离心转速过大，离心时间过长，会导致血小板下沉，上层富含血小板血浆内血小板含量就会减少;如果离心转速过低，离心时间过短，红细胞和白细胞不能很好地下沉，导致离心后分离界面不清，富血小板血浆含量较少，所制备出来的手工血小板收集率较低，且混入的白细胞和红细胞量较多，难以达到国家标准。我们经过长时间的探索，发现离心条件为速度2 000 r/min、时间7 min、温度22℃、降速7 r/min时所获得的血小板质量相对较好，血小板的收集率相对较高。

另外，分离方法的选择也会对手工浓缩血小板的制备产生影响。目前，分离方法有分浆夹式分离法和悬挂式虹吸分离法。分浆夹式分离方法是把离心后的血液置于分浆夹内，固定后，打开止血夹，依靠分浆夹的压力把富血小板血浆挤入空袋内，由于血液固定较好，分离界面不易破坏，并能较好控制流速，因而浓缩血小板收集率相对较高，红细胞及白细胞的混入量相对较少;悬挂式虹吸分离法也是血液成分制备常用的方法，但在制备浓缩血小板时，由于第一次离心时离心力相对较轻，分离界面稳定性较差，血液垂直悬挂时，分离界面易受外来阻力影响，分离界面易破坏，常常导致血小板收集量少，而红细胞及白细胞混入量相对较多。因此，富浆法制备浓缩血小板时，建议用分浆夹分离法制备。

［1］杨成民，李家增，季阳.基础输血学［M］.北京:中国科学技术出版社，2001:670-672.

［2］Sullivan M T，Cotten R，Read E J，et al.Blood collection and transfusion in the United States in 2001［J］.Transfusion，2007，47(3):385-394.

［3］王培华.临床输血学［M］.北京:人民卫生出版社，2002:312-313.

［4］车火娇，梁芬，李小梅.影响手工制备浓缩血小板数量因素的探讨［J］.护理实践与研究，2009，6(15):122 ～123.

［5］董长征，韦丽娟.两种不同方法制备混合少白手工血小板的比较［J］.医学理论与实践，2008，21(10):1204-1205.

［6］巴丽聪，于金华.影响手工制备浓缩血小板质量的原因分析［J］.中国民康医学，2011，23(24):3126-3127.