傅 冰，王东明

（丽水职业技术学院 环境工程分院，浙江 丽水323000）

1 引言

淀粉酶是能催化淀粉水解转化成葡萄糖、麦芽糖及其他低聚糖的一类酶的总称。在淀粉糖工业和食品工业中被广泛利用，是最早实现工业化生产，迄今为止用途最广、产量最大的酶制剂品种[1]。按水解淀粉方式不同，把淀粉酶分为α－淀粉酶、β－淀粉酶、糖化酶和异淀粉酶4类。目前工业生产上都以微生物发酵法大规模生产α－淀粉酶[2]，其中枯草芽孢杆菌生产的淀粉酶极其应用处于整个酶制剂的首位。自然界中具有十分丰富的产淀粉酶菌种资源，本实验从土壤中分离出高产淀粉酶能力的菌株，通过常规方法结合18SrDNA序列分析鉴定该菌株。通过化学诱变、物理诱变及复合诱变等方法诱变菌株，进一步筛选获得具有更高产淀粉酶能力的菌株，为今后获得能够应用于工业生产的高产淀粉酶菌株奠定了一定的基础。

2 材料与方法

2.1 材料

Taq酶、dNTPs、EasyPure Quick胶回收试剂盒、MarkerIII均购自TransGen Biotech生物公司；Mastercycle personal PCR 仪 （eppendorf，美 国）；Dolphlin－DOC Plus凝胶成像系统（Wealtec，美国）；HWY－100A恒温摇床（东莞吉之垄电子仪器有限公司）；DHZ－CA恒温摇床（江苏太仓实验设备厂）；2C40809023－723型分光光度计（上海欣茂仪器有限公司）；XW－80A混匀器（上海棋特分析仪器有限公司）。

平板初筛选及试管斜面保存培养基为胰化蛋白胨1%，酵母浸膏0.5%，NaCl 0.5%，可溶性淀粉2%，琼脂2%，pH值为7.0；液体复筛培养基为胰化蛋白胨1%，酵母浸膏0.5%，NaCl 0.5%，可溶性淀粉2%，pH值为7.0；验证有无组成型突变菌株培养基配方为胰化蛋白胨1%，酵母浸膏0.5%，NaCl 0.5%，可溶性淀粉2%，葡萄糖2%，琼脂2%，pH 值为7.0。……