桂 玲，王 静，祝爱珍，刘成成，刘革修

(1.湖南省肿瘤医院妇瘤科，湖南长沙410006;2.暨南大学医学院血液病研究所，广东广州 510632)

最近研究发现，卵巢癌中存在卵巢癌干细胞(cancer stem cells，CSCs)［1］，且与卵巢癌发生发展及其多药耐药密切相关［2］。这些研究结果提示，卵巢癌干细胞是卵巢癌防治过程中重要靶细胞。

NAC-1(nucleus accumbens-1)蛋白属于BTB/POZ转录因子家族成员，通过BTB/POZ结构域形成二聚体，与一些核蛋白相互作用，调节细胞生物学活性，参与胚胎干细胞的自我更新和多能性分化。在浆液性卵巢癌组织和细胞系中NAC-1表达和紫杉醇体外耐药相关，NAC-1通过部分抑制Gadd45gip1的表达、负向调节 Gadd45肿瘤抑制途径的组成，包括Gadd45α及其结合蛋白Gadd45gip1，从而促进肿瘤的生长和存活［3］。所以，本研究探究增强卵巢癌治疗效果的辅助方法，为提高临床卵巢癌治疗效果提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料和试剂:人卵巢癌细胞系HO8910(中国科学院上海细胞生物研究所，由暨南大学生命科学技术学院生殖研究室保存);RPMI-1640培养液(Gibco公司);新生胎牛血清(杭州四季青生物工程科技有限公司);MTT(Sigma公司);脂质体转染试剂盒LipofectamineTM2000(Invitrogen公司);Trizol、反转录试剂盒和SYBR GreenⅠMix试剂盒(Tiangen公司)、MTT试剂盒、蛋白裂解液和电化学发光(electrochemilum-inescence，ECL)试剂盒(碧云天生物技术有限公司);特异性siRNA和阴性对照siRNA(广州市锐博生物科技有限公司)。

1.2 靶向NAC-1基因寡核苷酸的设计:根据NAC-1基因的序列号NM 052876.21设计2条特异性siRNA序列:NAC-1 siRNA-1 为5'-UGACAGGCACCAACGUGUACA-3'，NAC-1 siRNA-2为5'-GAACUCGGUGCCCUUCUCCAU-3';另外设计一条阴性对照，与已知的人类基因无同源性，序列为5'-GACTT CATAAGGCGCATGC-3'。

1.3 细胞培养和转染:将人卵巢癌细胞系HO8910细胞以1×106个/孔接种于6孔板，用含10%胎牛血清的 RPMI 1640培养液培养于CO2体积分数为5%的37℃培养箱中。……