刘雅婷，杨爱军，杨 丽，李双明，向 琳，刘燕菲，李 敏，2*

(1.兰州大学基础医学院病理学研究所，甘肃兰州730000;2.甘肃省新药临床前研究重点实验室，甘肃兰州730000;3.兰州军区总医院病理科，甘肃兰州 730000)

肿瘤在宿主中生长，需要宿主提供更多的O2，肿瘤生长的速度远远大于支持它的物质［1］。在此过程中虽然有拟态血管的形成，但肿瘤血管的结构及功能都存在异常，因此氧气和营养物质都相对缺乏，在实体瘤中经常会出现低氧的现象。然而肿瘤细胞却可以在这种微环境中继续生存，特别是一群具有干细胞特性的CD133+细胞(cancer stem cells，CSCs)。

自噬的发生会形成双层膜的自噬体，之后与溶酶体结合，分解胞质中的大分子及细胞器［2］。起初认为自噬同凋亡及细胞坏死一样作为细胞的死亡形式，之后有研究表明自噬为一种新的细胞保护机制以促进肿瘤细胞存活，尤其是在低氧及缺血的微环境中。自噬会因细胞系的不同及肿瘤生长的不同阶段发挥不同的作用。本实验拟研究低氧微环境对结肠癌细胞生存的影响并观察其与自噬之间的关系。

1 材料与方法

1.1 细胞培养

结肠癌细胞系SW480由本实验室提供，常规培养于含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中，置于37℃、5%CO2饱和湿度下培养，每2天换液传代。将细胞置于氧气含量控制在1%，94%N2及5%的CO2。

1.2 免疫磁珠分选

取10瓶对数生长期结肠癌SW480细胞(细胞数为107个)，胰蛋白酶消化并吹打成单细胞悬液，1 500 r/min离心5 min，弃去上清液，加入300 μL的缓冲液缓冲(0.5%BSA 2 mmol/L EDTA 0.01%PBS)重悬，再加入FCR阻断剂及CD133磁性微珠(Miltenyi公司)各100 μL，充分混匀，置于4 ℃ 暗处避光孵育30 min。……