闫焕利，阴怀清，杜 洪，范泽卫

缺氧／缺血性脑损伤（hypoxia－ischemia brain damage，HIBD）是新生儿时期最常见且严重的神经系统损伤，其发病机制至今不明，目前缺乏有效的治疗方法。缺氧诱导因子－1α（HIF－1α）是被低氧激活的核转录因子，可以通过调节其靶基因的表达促进或者抑制细胞凋亡［1，2］。有研究显示，抑制HIF－1α的表达在脑缺血后的成年动物模型中产生神经保护作用［3，4］，但是HIF－1α及其抑制物在新生动物模型中的作用目前国内外报道甚少，本实验应用HIF－1α的抑制剂2－甲氧基雌二醇（2ME2）作用于新生大鼠缺氧缺血模型，以期为新生儿缺氧缺血性脑损伤的发病机制阐明和治疗提供新思路和理论依据。

1 材料与方法

1.1 试剂与药品 一抗（兔抗鼠 HIF－1α、Bax、Bcl－2）和二抗（即用型SABC试剂盒）及TUNEL细胞凋亡检测试剂盒均购自武汉博士德生物技术有限公司。2ME2系美国Cayman公司提供，由于2ME2是脂溶性粉末物质，本实验采用二甲基亚砜（DMSO）溶解后，用PBS稀释使有毒物质DMSO的浓度降为5%，制成2ME2溶液。

1.2 动物分组及模型制备 120只清洁级、封闭群、新生7d龄Wistar大鼠，体重11g～15g，雌雄不限，购自山西医科大学生理实验室动物房。随机分成假手术组（Sham组，n＝8）、缺氧缺血模型组（HIBD组，n＝56）、2ME2干预组（2ME2组，n＝56）。后两组根据处死时间不同又分为7个亚组：3h、6h、12h、24h、48h、72h、7d，每亚组各8只。Sham组给予麻醉后切开颈部皮肤，游离左侧颈总动脉后缝合皮肤；HIBD组给予麻醉后切开颈部皮肤，结扎左侧颈总动脉，缝合皮肤后休息90min，置于缺氧仓中（含8%氧气）2h。2ME2组同HIBD组制作HIBD模型，各亚组在缺血缺氧后10min给予一次性腹腔注射2ME2溶液（其中2ME2的含量为15mg／kg）。Sham组、HIBD组仅给予等量的DMSO＋PBS。……