杨 蓓 丁金兰 陈 雪

（中国医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室，沈阳 110001）

Ⅱ型糖尿病（T2D）是由于在胰岛素抵抗背景下进行性的胰岛素分泌缺陷所造成的，此型占全部糖尿病类型的90－95%；多种因素可以引发II型糖尿病，如遗传、不良生活方式、肥胖等，近年流行病学调查研究显示，环境砷暴露也可以导致2型糖尿病的高发［1，2］。实验研究也表明砷可以通过氧化应激来损伤胰岛β细胞功能［3］和诱发胰岛素抵抗而导致2型糖尿病发病［4］。核转录因子Nrf2是细胞内抑制氧化损伤及对抗外来化合物毒性最重要的核转录因子。因此本实验考察了亚砷酸钠对小鼠胰岛β细胞的Nrf2和其调控的抗氧化酶的诱导作用，希望为II型糖尿病发病及治疗提供一个新思路。

材料和方法

1.细胞培养与染毒

小鼠胰岛β细胞MIN6由哈佛大学赠送。培养时应用含有15%胎牛血清、5ul/Lβ－巯基乙醇、50umits/ml青霉素和50μg/ml链霉素的高糖DMEM培养基，于37℃、5%CO2，95%大气条件下培养。每2天更换一次培养基。应用2、4、6、8、10μmol/L的亚砷酸钠对MIN6细胞进行染毒6h，同时设立不加亚砷酸钠的培养液作为阴性对照。

2.Western Blot

收集细胞，裂解液裂解，超声处理，低温离心5 min，取上清液，应用BCA方法测定蛋白浓度。选择4－12%Tris－Glycine凝胶进行电泳，转膜并采用特异性抗体进行western blot分析，一抗：Nrf2（购于Santa Cruz公司）、β－actin（购于Sigma公司）。二抗：碱性磷酸酶标记的抗兔、抗小鼠均购自Sigma公司。加入ECF底物进行荧光显色，使用Typhoon 9410扫描免疫条带。应用Image J分析软件分析上述结果，以目的条带与内参β－actin的平均灰度值的比值表示蛋白水平，进行半定量分析。……