沈 艺，谢南姿

内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）是一类能增殖并分化为血管内皮细胞，但尚未表达成熟血管内皮细胞表型，也未形成血管的前体细胞[1]。有研究显示，EPCs不仅参与人胚胎血管生成，同时也参与出生后血管新生和内皮损伤后的修复过程[2]。目前，EPCs介导的治疗性血管再生及损伤血管修复已经成为心血管疾病治疗的研究热点之一。血管生成能力是EPCs最重要的功能之一。黄芪甲苷（astragalosideⅣ）也称黄芪皂苷甲、黄芪皂苷Ⅳ，是从中药黄芪中分离得到的一种具有多种药理活性的皂苷类化合物，具有调节机体免疫力、保护组织器官、降低血糖、抗细胞凋亡和抗炎、抗病毒等多方面的药理作用。有研究表明，黄芪甲苷可减少心肌细胞损伤和阻止内皮细胞功能障碍[3]。本研究主要观察黄芪甲苷对体外培养外周血EPCs血管生成能力的影响，探讨其可能的血管保护作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 FITC标记荆豆凝集素Ⅰ（FITC－UEA－Ⅰ）购自Sigma公司；DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白（DiI－acLDL）、人纤维连接蛋白（HFN）购自Chemicon公司；血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）购自Peprotech公司；FITC标记抗CD34抗体、抗CD133抗体和KDR购自BD公司；DETA－NO购自Molecular Probe公司；M199、胎牛血清购自Hyclone；1∶250胰蛋白酶购自上海生工生物工程技术服务有限公司，进口分装；人外周血淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物制品有限公司；体外血管形成试剂盒（Sigma公司）；黄芪甲苷（上海融禾公司）。

1.2 方法

1.2.1 EPCs分离 取外周血10mL，肝素抗凝，采用密度梯度离心法获取单个核细胞，接种在24孔板上。应用M199培养基（含20%胎牛血清，青霉素100 U/mL，链霉素100 U/mL）培养，每3 d～4 d换液，去除非贴壁细胞。……