毛 东 付晓光 陆 航

(辽宁医学院附属第一医院胃肠外科，辽宁 锦州 121001)

胃癌的预后与癌组织浸润深度及是否发生了淋巴结转移 相关〔1〕。研究显示，肿瘤相关淋巴管的形成能够促进肿瘤的转移扩散〔2〕。因此当前有很多研究关注于如何抑制肿瘤环境下淋巴管的形成。VEGFR3是最先被验证的淋巴管生成的特异性标记物。VEGFR3是淋巴管内皮生长刺激因子VEGFC的特异性受体。VEGFC与VEGFR3结合后可引起淋巴管内皮细胞增殖、迁移及抑制内皮细胞凋亡，从而发挥促进淋巴管新生的作用。神经纤毛蛋白(NRPs)是一种跨膜糖蛋白，目前研究证明NRPs在肿瘤的生长转移中起着至关重要的作用〔3〕。最新研究表明NRP2参与了VEGFC诱导的淋巴管内皮细胞迁移和淋巴管新生(特别是与肿瘤相关的淋巴管功能性新生)功能，在肿瘤动物模型中阻断NRP2功能发现肿瘤转移至哨兵淋巴结和远隔器官减少的现象〔4〕。本实验将构建重组腺病毒载体介导的NRP2-shRNA基因沉默载体，转染胃癌细胞株SGC7901后检测该细胞中NRP2的表达情况以及NRP2-shRNA转染前后对于抑制SGC7901细胞的增殖、侵袭迁移的能力的影响。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料 胃癌细胞株SGC7901购自中国协和细胞库;RPMI1640培养基和胎牛血清(FBS)购自Gibco公司;Trizol试剂、RT-PCR试剂盒、Marker、限制性内切酶等均购自TaKaRa公司;Lipofectamine 2000、OPTI-MEM等购自Invitrogen公司;兔抗人NRP2单克隆抗体、二抗、β-actin内参照购自Santa Cruz公司;超纯质粒提取试剂盒、质粒小提试剂盒购自QIAGEN公司;RNAi干扰序列以及引物序列设计、合成由赛业(广州)生物科技有限公司完成，并统一构建到重组腺病毒系统pAdEasy-1上，同时携带GFP作为荧光示踪标记物，-80℃保存;干扰序列及分组见表1。……