温都苏 刘禄成 魏 巍 李 志 郭 航 张 明

(吉林大学第二医院泌尿外科，吉林 长春 130041)

癌基因与抑癌基因的平衡紊乱在肿瘤的生长和转移中扮演着重要角色〔1，2〕。微小 RNA-21(miRNA-21)是目前公认的癌基因〔3，4〕，肿瘤抑素(Tumstatin)则是被广泛认同的抑癌基因〔5〕。已有研究证实，前者在膀胱癌病人的肿瘤组织中表达上调，后者则表达不足。由此推测，这两种基因的平衡失调在膀胱癌的发生发展中可能起着至关重要的作用。本研究应用反义miRNA-21/rAV-Tumstatin腺病毒载体，通过经尿道膀胱灌注的方法治疗，观察该载体对裸鼠膀胱原位移植癌生长的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 反义miRNA-21/rAV-Tumstatin腺病毒载体由本实验室构建〔6，7〕。人膀胱癌T24细胞株购自中国科学院上海细胞所。二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)比色仪为美国Sigma公司产品。原位末端标记(TUNEL)细胞凋亡检测试剂盒购自北京中山生物公司。BALB/C裸鼠购于中国医学科学院中国协和医科大学实验动物研究所。

1.2 方法

1.2.1 裸鼠膀胱癌模型的建立和疗效评估及肿瘤标本的处理按照参考文献〔6〕所述方法建立模型。选取20只瘤体大小几乎相同的成瘤裸鼠，随机分为四组，每组5只，分别每隔5 d经尿道膀胱灌注1次载体(反义miRNA-21、rAV-Tumstatin、联合应用组)和生理盐水(对照组)，每组均灌注4次，28 d为1个疗程。每隔7 d(灌注后的第2天)用ESDREF1.5T核磁扫描仪检测肿瘤大小，计算肿瘤体积。在实验结束后的第2天处死所有裸鼠，迅速切开膀胱，完整剥取瘤体称重，并用游标卡尺检测肿瘤的长径和短径，以长(mm)×宽(mm)表示肿瘤的大小，然后切片，10%甲醛固定，石蜡包埋备用。……