杜联峰 徐岗村 孙万邦 王宜峰 王胜香 罗军敏 姚新生 夏 嫱 杨 瑞 余 妍

(遵义医学院珠海校区/贵州省免疫学研究生教育创新基地，珠海 519041)

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni，CJ)为人及动物消化道共同易感菌［1］，目前CJ感染已成为全球范围内急性胃肠炎常见的病因之一［2］。CJ感染除引起急性胃肠炎外，还与格林－巴利综合征［3－6］(Guillain－Barrésyndrome，GBS)有非常密切的关系，是导致儿童发生急性迟缓性瘫痪的重要病因，目前尚无有效的预防和治疗措施。本室前期研究空肠弯曲菌重组蛋白PEB1免疫小鼠后可诱导产生较高滴度特异性抗体和致敏淋巴细胞，证明PEB1重组蛋白具有良好的生物免疫活性［7，8］。由于基因疫苗成本低，能诱导体液免疫和细胞免疫，被广泛运用于感染性疾病和肿瘤免疫治疗［9－11］。本研究以空肠弯曲菌peb1A基因为靶点，构建空肠弯曲菌核酸疫苗pcDNA3．1(－)－peb1A，采用不同免疫程序免疫昆明小鼠后检测其抗体滴度，初步评价疫苗的生物免疫活性和免疫程序，为空肠弯曲菌DNA疫苗的进一步研究奠定基础。

1 材料与方法

1．1 材料 PCR试剂盒、各种限制性内切酶、T4DNA连接酶、DNA标准 Marker 等购自TAKARA公司。PCR产物纯化试剂盒、胶回收试剂盒、质粒小量抽提试剂盒和NC膜等购自上海生工生物有限公司。jetPEITM转染试剂盒购自达科为生物技术有限公司。质粒大量抽提试剂盒购自QIAGEN公司。HRP－羊抗大鼠IgG、IgM购自北京博奥森生物技术有限公司。

1．2 实验动物 昆明鼠180只，雄性，每剂量组30只，6～8周龄，20～25 g/只，购于遵义医学院动物实验中心。

1．3 表达质粒、工程菌株、细胞和蛋白 质粒pcDNA3．1(－)，含有氨……