于秀艳 曾常茜 高 松 王文龙 高海燕 刘晓峰 (吉林省肿瘤医院，长春 130012)

宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一，是全球妇女中发病率仅次于乳腺癌而占第2位的恶性肿瘤，寻找和研制高效低毒的治疗宫颈癌的药物仍然是当前宫颈癌研究工作的热点［1-5］。我们前期研究发现，透骨草(Phryma leptostachya L．var．asiatica Hara)提取物对人宫颈癌Hela细胞增殖具有显著的抑制作用［6］。本实验观察透骨草提取物对人宫颈癌Hela细胞凋亡的诱导作用以及对Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平的影响，旨在为透骨草提取物的研究与开发提供实验依据。

1 材料与方法

1．1 药品试剂及仪器 人宫颈癌Hela细胞由吉林省肿瘤研究所提供;RPMI1640、小牛血清和胰蛋白酶为美国Gibco公司产品;MTT和DMSO为Sigma公司产品;药物采自辽宁金州大黑山，经王心毓老先生鉴定为透骨草科植物(Phryma leptostachya L．var．asiaticaHara);RS232型酶联检测仪为美国Bio-Rad公司生产;BB16UV型CO2培养箱为德国Heraeus公司生产。

1．2 方法

1．2．1 透骨草提取物制备方法 加热回流提取法:取干燥透骨草50克，加8倍量75%乙醇，提取2小时，过滤，滤液水浴浓缩成干膏。

1．2．2 荧光显微镜观察Hela细胞形态 对数生长期的Hela细胞，调节为5×107cells/L，接种于6孔培养板，5%CO2，37℃孵育24小时，弃去培养液，PBS缓冲液洗涤。实验组加入100μg/ml透骨草提取物的培养液2．0 ml，对照组加入RPMI1640细胞培养液2．0 ml，继续培养48小时后，消化并收集细胞，PBS缓冲液洗涤2次后，1 000 r/min离心5分钟，以PBS缓冲液重悬细胞，细胞悬液密度为1×1010cells/L。取上述细胞悬液95μl，加入5μl吖啶橙(0．1 g/L)使吖啶橙终浓度为5μg/m l，置37℃孵箱中避光染色10分钟，取上述混合液10μl滴于载玻片上，盖玻片封片后于荧光显微镜观察并摄片。……