何文强，尹继云，孟 晓，王梅叶，张文涛，曲宪东，李南南

武警河南总队医院泌尿外科郑州450052

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一［1-2］，目前主要采用手术、放疗和化疗等手段治疗，但是治疗后极易复发和进展，预后较差。近年来分子靶向治疗作为综合治疗的一个重要手段和新兴治疗模式在临床中受到越来越多的关注，因此寻找治疗膀胱癌的分子靶点具有十分重要的意义。Pim-3激酶是前病毒整合位点莫罗尼鼠白血病病毒家族的成员之一，属于钙/钙调蛋白依赖性激酶成员，具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性［3］。作者利用RNA干扰技术下调膀胱癌T24细胞中Pim-3的表达，研究其对膀胱癌细胞增殖和细胞周期分布的影响，并分析其可能的分子机制，旨在为以Pim-3为靶点的膀胱癌基因治疗提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1 细胞与试剂 膀胱癌T24细胞购自上海川翔生物科技有限公司;胰蛋白酶和RPMI 1640购自美国Gibco公司、小牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司;脂质体LipofectaminTM2000购自美国Invitrogen公司;CCK-8购自上海碧云天生物技术有限公司;Pim-3小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)、对照siRNA、兔抗人多克隆抗体Pim-3、Cyclin D1、Cdk2和P21均购自美国Santa Cruz公司。

1.2 细胞培养和转染 将膀胱癌T24细胞复苏后培养于含体积分数10%小牛血清的RPMI 1640培养基中，细胞分为3组:未处理组(不作任何处理)、对照siRNA组(采用50 nmol/L对照siRNA转染)和Pim-3 siRNA组(利用50 nmol/L Pim-3 siRNA转染)。当T24细胞达到90%左右融合时，按照脂质体LipofectaminTM2000转染试剂操作说明将Pim-3 siRNA和对照siRNA转入T24细胞。

1.3 Western blot检测 Pim-3、CyclinD1、Cdk2 和P21蛋白表达 收集转染后48 h的膀胱癌T24细胞，用细胞裂解液提取总蛋白，然后进行SDS-PAGE电泳。……