王凤羽，马林先，李聪敏，张 华，丰慧根

1)河南省人口和计划生育科学技术研究院;河南省人口缺陷干预技术研究重点实验室郑州450002 2)新乡医学院生命科学技术系新乡453000

染色体非整倍体即染色体数目异常，发生于生殖细胞则可能导致不育不孕、自发流产和先天出生缺陷，其中21、18、13、X和Y等染色体非整倍体最为常见，在早期自然流产中，非整倍体率高达50%，存活新生儿发生该病的几率为1/150～1/120，约占新生儿染色体异常的95%。目前，染色体异常治疗困难，疗效不满意，因此，快速准确地对染色体非整倍体异常做出产前诊断，对降低出生缺陷率，提高人口质量意义重大。多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification，MLPA)是2002年由荷兰的Schouten等［1］设计发明，仅需50～200 ng DNA，便能通过分子杂交、连接和PCR技术对40多个不同的待测核酸靶序列进行定性和半定量分析。根据其快速、特异、灵敏及高效的特点，近几年已开始应用于染色体畸变诊断。该研究运用MLPA技术对200例羊水进行检测，通过与传统核型分析得出的结果进行对比，探讨其在非整倍体异常及产前诊断中的应用价值。

1 对象与方法

1.1 研究对象 标本来自2010年10月至2011年8月河南省人口和计划生育科学技术研究院产前诊断就诊的孕妇，孕妇怀孕18～22周时，在临床医师告知下，选择羊水穿刺诊断200例。羊水标本2 mL用于MLPA检测，3～5 mL用于染色体培养。

1.2MLPA 方法

1.2.1 基因组DNA提取 取羊水2 mL，13 000 r/min离心5 min，尽量移走上清液，加入10～15 g/L蛋白酶K，55℃消化30 min，取此细胞裂解液0.5 mL进行DNA提取，并进行质量和浓度检测。

1.2.2 MLPA检测 采用MLPA非整倍体检测试剂盒(SALSA MLPA P095，荷兰MRC公司)，该试剂盒包括36条探针，其中13、18、21和X染色体上分别有8条，另4条位于Y染色体，可检测这5种染色体拷贝数的变化。……