张楠楠，潘卫东，郑国庭，李 靓，崔玉琳，秦 松，薛乐勋#

1)郑州大学生物工程系细胞生物学研究室郑州4500012)郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001 3)宁波大学海洋生物技术重点实验室宁波315211 4)中国科学院海洋研究所青岛266071 5)中国科学院烟台海岸带研究所烟台264003

二酰甘油酰基转移酶(diacylglycerol acyltransferase，DGAT)是催化生物合成三酰甘油最后一步的关键酶，在动植物中普遍存在［1］。研究［2］表明:DGAT是三酰甘油生物合成途径中惟一与三酰甘油合成速率保持一致的限速酶，其主要作用是催化二酰甘油加上酰基脂肪酸形成三酰甘油。DGAT1和DGAT2尽管在基因结构上有差异，但在生物合成三酰甘油中的作用相似，DGAT1在三酰甘油代谢中具有更广泛的作用，而DGAT2更侧重于特殊脂肪酸的积累，二者均能执行三酰甘油合成途径的最后一步［3］。微藻由于光合效率高、生物产量高、生长繁殖快、生长周期短和自身合成油脂能力强的特点被认为是生物柴油的巨大资源库［4］。作者利用RT-PCR技术克隆了甘蓝型油菜中已知的DGAT1和DGAT2基因的cDNA序列，并构建了以SV40启动子驱动目的基因表达，以Bar基因作为筛选标记的微藻真核表达载体，探讨以微藻生产生物柴油的途径。

1 材料与方法

1.1 材料、菌株和主要试剂 甘蓝型油菜(Brassica napus)高油609为商品化种子，大肠杆菌 DH5α、pSV40rPA/CaMVBar系实验室保存，pMD18-T Simple载体、限制性内切酶XhoⅠ和XbaⅠ及Taq DNA聚合酶均购自大连宝生物工程公司，RNA提取试剂Trizol购自Invitrogen公司，AMV第一链cDNA合成试剂盒购自上海生工生物工程技术服务有限公司，凝胶回收试剂盒和质粒DNA提取试剂盒购自杭州维特洁生物公司。……