翟文杰，翟明霞，吕 虹，祁元明，高艳锋

郑州大学生物工程系郑州450001

结核病是由结核杆菌引起的一种慢性传染病，目前仍然是发病率和病死率较高的一种传染病。近年来，结核杆菌和人体免疫缺陷病毒双重感染的出现造成个体机会性感染更加严重［1］。传统预防结核病的卡介苗(BCG)免疫效果不稳定，对预防成年人肺结核缺乏有效性，并且随着结核杆菌多重耐药菌株的出现［2］，新型抗结核疫苗的研制变得更加迫切。结核杆菌分泌蛋白CFP21能够诱导结核鼠及结核患者产生高水平的肿瘤坏死因子-γ(tumor necrosis factor-γ，TNF-γ)［3］，具有高度的免疫原性，是结核疫苗设计的候选抗原。因此，寻找CFP21抗原的HLA-I限制细胞毒T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)表位对开发安全高效的新型结核疫苗具有非常重要的意义。通过作者所在的课题组前期对CFP21抗原的HLA-A*0201限制性CTL表位的研究［4-5］，预测在CFP21抗原中可能存在 HLA-A*03限制性 CTL表位［6］。通过抗原肽修饰改造［7］、结合力分析［8］和细胞毒活性［9］等实验，鉴定结核分枝杆菌CFP21抗原同时针对HLA-A*0201/*03型别的广谱CTL表位，为今后开发适应更广泛人群的结核疫苗奠定基础。

1 材料与方法

1.1 血液样本与细胞株 HLA-A*03+PPD+健康供者的外周血来自实验室的志愿者。抗原多肽转运蛋白(TAP)缺陷的T2A3细胞由美国纽约血液中心安秀丽教授惠赠。

1.2 主要试剂和实验器材 RPMI 1640培养基(Invitrogen公司)，胎牛血清(FBS，杭州四季青公司)，二甲基亚砜(DMSO，天津市德恩化学试剂有限公司)，重组人 β2微球蛋白(rβ2-M)、丝裂霉素 C、重组鼠抗人rβ2-M单抗及细菌脂多糖(LPS)(Sigma公司)，尼龙毛柱(Wako公司)，FITC-羊抗鼠……