常凯杰，田 芳，闫 苒，刘 彤，黄幼田，郑晓枫，赵继敏，江亚南#

1)郑州大学基础医学院临床医学系郑州450001 2)郑州大学基础医学院病理生理学教研室郑州450001

食管癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤的2%。核因子 κB(nuclear factorkappa B，NF-κB)是一类关键性的核转录因子，参与免疫应答、炎性反应、细胞凋亡以及肿瘤的形成和转移等多种生理、病理过程中的基因调控［1］。食管癌细胞系 EC1细胞中 NF-κBp65、NF-κBp50 蛋白表达阳性［2］，提示NF-κB基因可能参与了食管的癌变过程。抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)是 NF-κB 的特异性抑制剂。目前，关于PDTC对食管癌细胞系影响的研究国内外未见报道。作者拟观察PDTC对食管癌细胞系EC1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响，探讨PDTC用于辅助治疗，进而提高食管癌疗效的可行性。

1 材料与方法

1.1 材料 小牛血清购自天津 TBD公司，RPMI 1640培养粉购自美国Gibco公司，MTT、二甲基亚砜(DMSO)及碘化吡啶(PI)均购自美国Sigma公司。Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒购自宝赛生物公司，细胞周期检测试剂盒购自美国BD公司。EC1细胞系由香港大学曹世华教授惠赠。

1.2 细胞培养 EC1细胞在含有体积分数10%的胎牛血清，100 kU/L青霉素，100 mg/L链霉素的RPMI 1640培养液中，于37℃、体积分数为5%CO2孵箱中培养。0.2 g/L乙二胺四乙酸和0.5 g/L胰蛋白酶混合液消化、传代，备用。

1.3 PDTC对EC1细胞增殖影响的观察 取处于对数生长期的EC1细胞，调整细胞浓度为4×107L－1，接种于 96 孔板。分别加入 1、5、10、50 和 100 μmol/L的 PDTC 作用 24、48、72 h后(均设 5个复孔)，每孔加入MTT 20 μL，继续培养4 h后去上清，每孔加入150 μL DMSO，振荡10 min，在酶标仪上以未加药的空白对照孔调零，490 nm处读取吸光度(A)值。细胞增殖抑制率=(1－实验孔A值/对照孔A值)×100%。……