张振宇 张晓丽 程红球

（1.汕头大学医学院第二附属医院，广东 汕头 515041；2广东省深圳市第二人民医院，广东 深圳 518035）

皂荚为豆科植物皂荚的果实，味咸，性温，无毒，是中医治疗乳腺癌、肺癌、肝癌等多种癌症常用的配伍药之一，被列为抗癌中草药。2005年6月，香港理工大学与美国国立癌症研究所研究发现［1-2］，皂荚的浓缩液具有抗癌特性，可有效地抑制血癌及多种人类固体肿瘤，包括乳腺癌、肝癌和前列腺癌等癌细胞的生长，但其作用的物质基础不明。本实验主要通过逐级提纯皂荚研究其对肝癌细胞的作用机制，并为进一步分析其作用成分提供基础。

1 材料与方法

1.1 细胞株人肝癌细胞bel-7402，由上海细胞生物学研究所陈瑞铭1978年建株，购自武汉大学中国典型培养物保藏中心。

1.2 药物皂荚由湖北省药材公司提供，皂荚提取液由湖北中医学院药学院制作提供，皂荚生药质量浓度为1 g/mL。

1.3 试剂及仪器bax单抗、bcl-2单抗、P53单抗、超敏S-P（鼠）即用型免疫试剂盒、DAB显色剂、Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒、TIANamp Genmic血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒、PCR-ELISA端粒酶试剂盒均由福建迈新公司提供，RPMI-1640培养液、DMSO、小牛血清、MTT等均由晶美公司提供。流式细胞仪（美国COUITER公司，EPICSELTE ESP型），倒置相差显微镜 （日本OLYMPUS公司，LH50A型），电泳仪（CBS公司，MGU-102T），凝胶成像分析仪 （美国UVP公司，GDS8000型），液闪仪（美国BACKMAN COULTER公司，LS6500型），酶标仪器（美国Bio-Rad公司），净化工作台（苏州，SW-CJIF 型），CO2培养箱（美国 SHELDON 公司，TC2323型）。

1.4 分组随机分为对照组、皂荚提取物低、中、高剂量组（质量浓度分别为 0.05、0.1、0.2 mg/mL）。

1.5 细胞培养人肝癌细胞bel-7402接种于含10%小牛血清、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的RPMI-1640完全培养液中，在37℃、含5%CO2培养箱内培养，并用0.25%胰蛋白酶消化传代。……