晁 旭 崔亚亚 成 晓 魏敏慧 党 琳 史海龙 杨新捷

（1.陕西中医学院基础医学院，陕西 咸阳 712046；2.西北大学生命科学学院，陕西 西安710069）

土贝母为葫芦科植物，是一种广泛应用的传统中药［1］，具有散结、消肿、解毒之功效［2］。采用现代提取工艺和分析方法已经从土贝母分离出14种皂苷，其中土贝母皂苷Ⅰ、Ⅱ被证明具有抗肿瘤，抗炎和提高免疫力的作用［3-4］。研究发现，土贝母皂苷Ⅱ是最有希望用于临床试验的化合物［5］。本研究应用流式细胞术（FCM）分析土贝母皂苷Ⅱ对癌前病变肝细胞DNA合成和细胞周期的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 Wistar大鼠，购于第四军医大学；二乙基亚硝胺（DEN）购自Sigma公司。土贝母皂苷Ⅱ由陕西中医学院中药教研室提供。

1.2 造模与给药 将大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组，每组6只。对照组动物正常饲喂，模型组与治疗组于第1日按200 mg/kg体质量经腹腔一次性注射1%DEN，10 d后按2 mL/kg体质量第1次口服促癌剂（50%CCl4-橄榄油溶液），以后每隔3 d口服1次CCl4。实验第4周起，治疗组同时每日按200 mg/kg体质量灌服土贝母皂苷Ⅱ，共20 d。

1.3 标本采集与检测 （1）第16周取材进行肝细胞分离，按Seglen［6］改良法进行操作。大鼠经腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，暴露肝脏，门静脉插管，在无菌条件下以恒温灌流泵先后灌注冲洗液和0.05%Ⅰ型胶原酶溶液各15 min。（2）收集对照组和实验组细胞，用磷酸盐缓冲液 （PBS）洗涤后，将细胞重悬于0.3 mL PBS，迅速注入预冷的75%乙醇，固定。测定时用PBS洗涤去掉乙醇，将细胞重悬于0.3 mL PBS中；加入0.6 mL碘化丙啶溶液，4℃避光染色15 min以上，经50 μm尼龙网过滤后，并以人末梢血淋巴细胞作为内参标准，用EPIC Scoulter流式细胞仪分析细胞DNA含量，并分析细胞周期。

2 结 果

见表1。与对照组比较，模型组动物处于G1/G0期肝细胞显著增加（P＜0.05），而 S 期细胞数明显减少（P＜0.01）。 与模型组相比，治疗组肝细胞处于 G1/G0期肝细胞显著增加（P＜0.05），与对照无明显差别；而S期细胞数也恢复至正常水平。

表1 各组动物肝脏细胞G1/G0期及S期细胞数比较（%，±s）

表1 各组动物肝脏细胞G1/G0期及S期细胞数比较（%，±s）

与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与对照组治疗后比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

组 别 S期 G期对照组 5.53±1.34 28.52±2.15 n G1/G0期6 65.95±4.32模型组 18.08±1.02△△ 32.46±2.78 6 49.3±3.87△治疗组 6 61.08±2.28* 7.82±2.78** 31.1±2.97

3 讨 论

本实验用FCM的DNA分析技术探讨了土贝母皂苷Ⅱ诱导细胞分化的机制，实验结果显示肝细胞在正常状态下，绝大多数处于G0期，极少数处于S期。模型组动物经DEN启动癌变后，使处于G1/G0期的肝细胞进入S期，G1/G0期细胞数减少，S期细胞数明显高于对照组，提示其DNA合成旺盛。治疗组治疗后的S期细胞较模型组明显减少，而G1/G0期细胞增多，说明土贝母皂苷Ⅱ可以阻止肝细胞从G1期向S期进程，造成G1期细胞的堆积。研究表明，如细胞被阻断在G1期，更能有效地控制肿瘤的增殖［7］。总之，本研究结果显示，土贝母皂苷Ⅱ对肿瘤的生长有显著的抑制作用，而且可能是通过阻滞肿瘤细胞滞留于G1期，从而改变了肿瘤细胞的分裂过程，抑制了肿瘤细胞的增殖。

［1］中国科学院植物志编辑委员会.中国植物志［M］.北京：科学出版社，1986：105-128.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典2000年版：一部［M］.北京：化学工业出版社，2000：143.

［3］YuL J，Ma RD，Wang YQ，et al.Potent antitumor activity and low toxicity of tubeimoside Ⅰ isolated from Bolbostemma paniculatum ［J］.Planta Med，1994，60（4）：204-208.

［4］Yu LJ，Yu TX，Ma RD.Inhibition of the tumor promoting action of 12-O-tetradecanoylphorbo l-13-acetate by tubeimosideⅢisolated from Bolbostemma paniculatum［J］.Carcinogenesis，1995，16（12）：3045-3048.

［5］杨萍，于廷曦，马润娣，等.土贝母皂苷诱导人宫颈癌Hela细胞周期阻滞和细胞凋亡［J］.癌症，2002，21（4）：346-350.

［6］Seglen PO.Preparation of isolated rat liver cells.In：Prescott DM.Methodsin Cell Biology［M］.New York：Academic Press，1987：29-83.

［7］杨兼辉.细胞动力学与肿瘤药物治疗.朱世能.肿瘤基础理论［M］.上海：上海科学技术出版社，1986：177-180.