于春水 苏江维 胡 珍

（川北医学院附属医院，四川 南充 637000）

姜黄素（curcumin）是从姜科植物姜黄中提取的一种酚类物质。动物实验表明，姜黄素具有抗氧化、抗感染、抗炎及抑制肿瘤生长等作用［1］。国外学者研究发现，姜黄素能够抑制膀胱癌T24细胞增殖，阻止该细胞在G2-M期，其作用呈浓度依赖性，同时姜黄素还具有下调T24细胞的细胞周期蛋白A（cyclinA），上调细胞周期素依赖激酶抑制剂P21 WAF1/CIP1，降低环氧酶-2 mRNA及其蛋白表达的作用［2］。本研究将不同浓度的姜黄素作用于培养的HaCaT细胞，观察其对HaCaT细胞增殖及在缺氧培养下对HaCaT细胞中低氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α）蛋白表达的影响，探讨姜黄素对HaCaT细胞增殖及HIF-1α的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 HaCaT细胞株（武汉大学典型物保藏中心），HIF-1α兔抗人单克隆抗体（Sigma公司）。姜黄素（Sigma公司），纯度＞96%，用DMSO稀释，等量分装，-20℃保存。用时用培养液稀释为 0.1%（v/v），以不影响细胞的生长。

1.2 姜黄素对HaCaT细胞增殖抑制的检测 （MTT法） HaCaT细胞以DMEM培养基常规培养，每2～3日换液、传代。取对数期生长的HaCaT细胞，以1.0×104/mL接种于96孔培养板中，每孔100 μL，24 h 后弃培养液，处理组细胞分别加入 10、20、30 μmol/L的姜黄素，每孔100 μL，对照组仅用DMEM处理，每孔均为100μL，设3个复孔。常规设立对照组，加入与姜黄素等体积的培养液于对照组内。于培养24 h时，每孔加入10 μL MTT（5 mg/mL）孵育4 h，弃上清，然后每孔加入 DMSO 100 μL，沉淀充分溶解后，用酶标仪测定570 nm波长下OD值，生长抑制率＝（1-实验组OD值/空白组OD值）×100%。

1.3 HaCaT细胞的缺氧处理与免疫组化检测 将HaCaT细胞的单细胞混悬液以每孔1×104的密度小心接种至放有盖玻片的6孔板内，然后每孔加入2.0 mL的DMEM培养液。……