黄立宁，韩建民，刘 雅，刘 悦，曹翠丽

（河北医科大学1.第二医院麻醉科;2.神经生物研究室，河北石家庄 050000）

新生大鼠海马神经元原代无血清培养与鉴定

黄立宁1，韩建民1，刘 雅1，刘 悦1，曹翠丽2*

（河北医科大学1.第二医院麻醉科;2.神经生物研究室，河北石家庄 050000）

目的 建立一种简单、易行的海马神经元无血清体外培养方法以获得高纯度、高活力的海马神经元。方法取新生24 h内SD大鼠，分离海马，经消化后种植于包被有Matrigel基膜的玻片上，24 h后换含有N2、B27的Neurobasal无血清培养基，于不同时间在倒置相差显微镜下观察细胞的生长状态;采用β-tublinⅢ免疫荧光细胞化学技术鉴定海马神经元纯度。结果 大部分海马神经元于3～24 h贴壁且可长出细长突起，3 d细胞具有典型神经元的形态特征，5d后神经元突起进一步增多并形成稠密的网络连接，7 d后神经元胞体丰满，趋于成熟。经β-tublinШ免疫荧光技术鉴定纯度为94.2%±3.6%。结论 此方法简单有效，可获得高纯度的海马神经元。

海马;神经元;原代培养;新生大鼠

对于众多神经领域研究，诸如神经元发育分化、神经再生、神经疾病的发生机制，原代培养的神经元是一个很好的实验模型，具有影响因素单一、机体干扰因素少和结果易分析等优点。所以，常用于细胞和分子水平上深入研究神经元物质代谢、生理、药理及形态特征［1－2］。海马属于大脑的边缘系统，在学习、记忆、情绪反应及神经系统疾病的病理生理变化等方面有重要作用，而且海马组织是中枢神经系统内主要的神经干细胞聚集区，具有高度序化板层结构和神经元相对独立分布的特点，境界相对清晰，便于取材，因此，海马神经元体外培养模型被广大基础医学和临床医学研究者当做理想的实验模型。……