郑 莹，霍颖异

（1.中国大洋矿产资源研究开发协会，北京 100080；2.国家海洋局 第二海洋研究所，国家海洋局 海洋生态系统与生物地球化学重点实验室，浙江 杭州 310012）

0 引言

浙江省海域面积26万km2且海岛众多，海岸线全长6 486km，居全国首位［1］。浙江省海域属于亚热带、温带气候，利于海洋生物的繁殖和生长，是生产力较高的海域，其独特的海洋环境蕴藏着丰富的海洋微生物资源。然而目前关于浙江沿海沉积物微生物多样性的报道还较少。2008年，霍颖异 等［2］采用可培养和非培养相结合的方法调查了浙江苍南近海沉积物的细菌多样性；其他还有些相关研究报道多采用平板计数或生理生化鉴定的调查方法［3－4］，未能真实反映样品中微生物的分类地位和多样性。

本研究采用纯培养方法和基于16SrRNA基因序列，调查和分析浙江省镇海潮间带沉积物的可培养细菌群落组成，不但丰富了近海海洋细菌种质资源，初步探讨了海洋细菌群落在生态系统中作用，对近海细菌资源开发也具有一定的指导意义。

1 材料和方法

1.1 样品采集

2008年6月，对浙江省镇海潮间带沉积物插管取样，将柱状沉积物样品进行1cm间隔分层分装，短期4℃阴暗保存，运抵实验室后即开展相关工作。本文采用表层0～1cm层沉积物开展研究。

1.2 菌株的分离与保藏

采用2216寡营养培养基分离并纯化海洋细菌。2216寡营养培养基配方为（L－1）：NaCl 19.45g，MgCl2·6H2O 12.6g，MgSO4·7H2O 6.64g，CaCl21.8g，KCl 0.55g，NaHCO30.16g，KBr 0.08g，SrCl2·6H2O 0.057g，H3BO30.022g，Na2SiO3·9H2O 0.093g，NaF 0.002 4g，NH4NO30.002 4g，Na2HPO40.008g，蛋白胨0.5g，酵母抽提物0.1g；用5mol·L－1NaOH将pH值调至7.2。固体培养基另加20g／L琼脂粉。

取沉积物样品约0.5g，放入3mL培养基盐溶液中。……