严 红 ，高丹丹，胡 君

(天津中医药大学第一附属医院，天津 300193)

益肺通络胶囊由党参、虎杖、核桃仁、川芎等中药组成，具有补益肺肾、活血消痰、疏通肺络之功效，主治肺肾两虚、咳嗽气喘、低氧性肺动脉高压(COPD)、肺纤维化、肺心病等。虎杖苷(PD)为虎杖中重要的生理活性成分，也称白藜芦醇苷[1]，研究表明，PD能抑制心肌收缩、抑制血小板聚集、降血脂、抗脂质过氧化、抗慢性常压低氧性肺动脉高压[2]，对H/R诱导的肾小管上皮细胞损伤有一定的保护作用[3]。为此研究建立益肺通络胶囊中虎杖苷含量测定方法 ，本方法准确、可靠、重现性好，可用于益肺通络胶囊的质量控制。

1 仪器与试药

岛津高效液相色谱仪(LC-10AT VP紫外检测器，SPD-10A VP高压输液泵，N2000数据工作站 ，浙江大学智能信息研究所)；AG-135型电子天平 (十万分之一，梅特勒-多利托)；TCQ-250型超声波清洗器(北京医疗设备二厂)。虎杖苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号111575-200502)；益肺通络胶囊(本院制剂室提供，批号100906、101106和101108)；乙腈 (色谱纯 )，水 (纯化水)，其他试剂均为分析纯 (天津市化学试剂批发公司)。

2 方法与结果

2.1色谱条件 色谱柱：Inerter C18柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm) ；流动相 ：乙腈-水 (23∶77)[4]；流速：1.0 ml/min；进样量：20 μl；检测波长：306 nm；柱温：室温；理论板数按虎杖苷峰计算不低于3 000。

2.2溶液制备

2．2．1对照品溶液的制备 取虎杖苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1 ml含15 μg的溶液，即得。

2．2．2供试品溶液的制备 取本品内容物，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2．2．3阴性对照溶液的制备 按处方取除虎杖的各味药材，按工艺制得阴性制剂，再按“2．2．2”项下方法制得阴性对照溶液。

2.3专属性考查 分别精密吸取虎杖苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，按“2．1”项下色谱条件进样，结果阴性对照溶液无干扰，见图1。

1．虎杖苷图1 对照品(A)供试品(B)阴性对照(C)HPLC色谱图

2.4线性关系考查 取虎杖苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成每1 ml含虎杖苷0.148 mg的溶液，作为贮备液，再分别精密量取0.5、1、1.5、2和2.5 ml，置10 ml量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，分别精密吸取上述5种浓度的对照品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件分析，以对照品浓度(μg/ml)为纵坐标，峰面积值为横坐标，求得回归方程：Y=3.06×10-5X(r=0.999 9)。结果表明在0.148～0.740 μg范围内线性良好。

2.5精密度试验 取益肺通络胶囊(批号100906)内容物，研细，取约0.5 g，1份，精密称定，按照“2．2．2”项下方法操作，按“2.1”项下色谱条件分析，连续进样6次，测得样品中虎杖苷峰面积的RSD为0.6%，符合要求。

2．6稳定性试验 取益肺通络胶囊(批号100906)内容物，研细，取约0.5 g，1份，精密称定，按照“2．2．2”项下方法操作，按“2.1”项下色谱条件分析，分别在0、1、2、3、4、5、6、7和8 h测定样品中虎杖苷峰面积，测得峰面积值的RSD为0.4%，表明供试品溶液在8 h之内稳定。

2．7重现性试验 取益肺通络胶囊(100906)内容物，研细，取约0.5 g，共6份，精密称定，按照“2．2．2”项下方法操作，按“2.1”色谱条件分析，测得样品中虎杖苷平均含量为1.62 mg/g，RSD为0.7%。

2．8回收率试验 取同一批号样品(批号100906)内容物，研细，取约0.25 g，共6份，精密称定，分别加入虎杖苷对照品溶液0.148 mg/ml各2.5 ml，加入稀乙醇47.5 ml，再按照“2．2．2”项下方法操作，制得供回收率用供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析，计算回收率，结果平均回收率为101.4%，RSD为1.5%。结果见表1。

表1 回收率试验结果

2．9样品测定 取益肺通络胶囊 (批号 100906、101106、101108)，分别按“2．2．2”项下方法制备供试品溶液，按“2．1”项下色谱条件进样，结果3批益肺通络胶囊中的虎杖苷含量分别为1.62、2.90和3.24 mg/g。

3 讨论

3.1供试品溶液制备方法 本试验先后考察不同提取溶剂 (稀乙醇、甲醇和80%甲醇)、不同提取方法(回流、超声)、不同超声处理时间 (15、30和45 min)及提取溶剂用量 (25、50和75 ml)对虎杖苷含量测定的影响，最终确定供品溶液制备方法为稀乙醇50 ml，超声30 min，该条件省时、节能环保。

3.2供试品提取和保存方法 《中国药典》[4]收载的虎杖苷含量测定方法要求避光操作。为此采用无色透明量瓶和棕色量瓶超声提取样品，无色透明样品瓶和棕色样品瓶存放供试品溶液，含量测定结果一致，故本方法未做避光规定。

3.3检测波长的确定 在190～600 nm进行波长扫描，虎杖苷在 306 nm处有最大吸收峰，根据《中国药典》2010年版一部虎杖[4]项下，最终确定306 nm为检测波长。方法学考察表明，高效液相色谱法测定该制剂中虎杖苷含量，方法准确、可靠、重现性好，可以作为该制剂的质控指标。

1 高守红，杨少麟，范国荣.虎杖苷的研究进展 .药学实践杂志，2005，23(30)：145

2 陈莉延，梁标，金勋杰，等．白藜芦醇苷对大鼠慢性常压低氧性肺动脉高压的防治作用．实用医学杂志，2002，18(8)：807

3 胡语航，王兴勇，何素蓉，等．白藜芦醇苷对缺氧复氧HK2细胞损伤保护作用的研究．第三军医大学学报，2008，30(22):2120

4 中国药典.一部．2010：194