谈晓红，马 鹏

（1.延安市卫生学校；2.延安大学附属医院，陕西延安71600）

AKT2在胃癌中的表达及意义

谈晓红1，马 鹏2

（1.延安市卫生学校；2.延安大学附属医院，陕西延安71600）

目的探讨胃癌中AKT2表达情况及临床病理意义。方法采用免疫组化法（S-P法）检测80例胃癌组织及癌旁组织中AKT2及的表达情况。结果AKT2在胃癌中的表达率72.5%，癌旁组织中表达率为12.5%，胃癌中的表达明显高于癌旁组织，二者之间差异具有显著性（P＜0.05），AKT2的表达与有无淋巴转移、分化程度及临床分期有关（P＜0.05），与年龄、性别及肿瘤大小无关（P＞0.05）。结论AKT2在胃癌组织中的蛋白表达显著低于癌旁组织，提示：AKT2的异常表达与胃癌的发生发展有关，检测AKT2达蛋白表达可作为判定胃癌生物学行为的的辅助指标。

胃癌；AKT2；蛋白表达；免疫组化

丝／苏氨酸激酶（serine／threoninekinase，AKT，又名为蛋白激酶proteinkinase B，PKB）在许多人类肿瘤组织中都存在高表达，与多种人类肿瘤发生发展有关。AKT2是AKT的亚型之一，可引起细胞转化，故被确定为癌基因［1］，研究发现在多种肿瘤组织中都存在AKT2基因扩增、蛋白的过度表达或活化［2］。我们应用免疫组化技术检测AKT2蛋白在胃癌组织中的表达，以探讨其在胃癌发生和发展过程中的作用及意义。

1 材料和方法

1.1 材料

收集2008～2010年延安大学附属医院普外科术后胃癌大体标本80例，术前均未化放疗，男56例，女24例。年龄23～72（平均54岁）。经苏木素伊红染色，病理医生诊断。兔抗人AKT2多克隆抗体，购自北京博奥森生物技术公司，（S～P）试剂盒及（DAB）购自北京中杉生物技术有限公司。

1.2 方法

检测AKT2蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达情况。标本经10%甲醛固定，石蜡包埋，4μm厚的石蜡切片65℃烘烤，脱蜡，3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶，微波修复抗原，10%正常山羊血清封闭，AKT2多克隆抗体及PTEN单克隆抗体（1∶50）4℃过夜孵育，磷酸盐缓冲液（PBS）冲洗，加生物素标记抗人IgG药置于室温下30 min，冲洗，辣根酶标记链霉卵白素室温下孵育30 min，冲洗后DAB显色，苏木素染色，封片。光镜观察。用已知阳性胃癌切片作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判断

AKT2阳性染色主要定位于细胞浆，呈棕黄色细小颗粒，以细胞浆呈棕黄色颗粒为阳性。由两位病理科医师随机选择5个有代表性的视野计数200个细胞，按阳性细胞占同类记数细胞的百分比将免疫组化结果分为阴性，即百分比＜10%；阳性即百分比＞10%。实验结果拍摄成像。

1.4 统计学方法

采用SPSS13.0统计学软件进行统计学分析，采用χ2检验对免疫组化结果进行分析处理，以P＜0.05为差异具有显著意义。

2 结果

所检测的80例胃癌中AKT2表达率为72.5%，癌旁组织中AKT2表达率为12.5%，可见AKT2在胃癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P＜0.05）。详见表1。

AKT2在胃癌中的表达与患者的年龄、性别、肿瘤的大小无相关性（P＜0.05），与组织分化程度、有无淋巴转移及临床分期相关（P＜0.05）。详见表2。

表1 胃癌及癌旁组织中AKT2阳性表达情况

表2 AKT2表达与胃癌临床病理特征指标关系

3 讨论

AKT是一种丝氨酸／苏氨酸激酶分子，是PI3K／AKT通路的重要成分，近年来研究表明，许多人类肿瘤组织中都存在磷酸化AKT，的高表达，该通路在肿瘤细胞恶性增值，血管生成和转移以及对放化疗拮抗中起重要作用。活化的AKT启动一系列与细胞凋亡、细胞周期调控、端粒酶活性、血管生成、细胞侵袭迁移相关的程序［3］。因此，AKT作为细胞生存的一个关键性因子，对于肿瘤的形成模式及其诊断与治疗具有十分重要的意义，在肿瘤发生和抗药性方面也起着重要作用［4］。

作为AKT家族3个成员（AKT1、AKT2、AKT3）之一的AKT2更多地参与了人类肿瘤的发生和发展［5，6］，基因扩增后发现在很多的人类肿瘤组织中存在AKT2基因扩增和mRNA过表达，AKT2的过表达可以使NIH3T3细胞发生恶性转化，因而被确定为癌基因［6］，它与人类肿瘤的发生发展更为密切。研究证实AKT2是参与结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等肿瘤发生发展的主要形式［3］；AKT2其活化还是依赖于PI3K对含有肌醇的膜磷脂酰肌醇环上3位羟基的特异磷酸化，AKT2主要介导体内PI3K依赖的细胞的粘附、运动、侵袭和转移效应［7］。

胃癌是常见的消化道肿瘤，在胃癌的发生中，从正常胃黏膜上皮转化成癌是一个多步骤的过程，是由于多种基因异常在多年的阶段中积累的结果，其中涉及到多种癌基因，抑癌基因，端粒及端粒酶，细胞黏附因子及DNA错配修复基因的异常和积累，本结果表明，在80例胃癌组织中，AKT2阳性表达72.5%，明显高于癌旁组织12.5%，差异有显著性（P＜0.001），可见在胃癌组织中存在AKT2的高比率表达，提示：AKT2基因的激活在胃癌发生发展中起重要作用；实验还结果显示：AKT2蛋白在胃癌组织中的表达与组织分化程度明显相关，低分化胃癌中阳性率为85.4%，明显高于高分化癌的阳性表达率53.1%，差异有显著性（P＜0.05）。有淋巴结转移组AKT2阳性率为82.6%，明显高于无淋巴结转移组58.1%，差异有显著性（P＜0.05）。提示：AKT2阳性表达可能与胃癌的恶性行为有关，是淋巴结转移的重要指标。

总之，AKT2表达上调对于胃癌的发生、发展可能起重要作用，可能有助于胃癌的预后判断。提示AKT2达蛋白表达可作为判定胃癌生物学行为的的辅助指标，对AKT2的深入探讨有望为胃癌发病机制的研究及治疗提供新靶点。

［1］Lim WT，Zhang WH，Miller CR，et al.PTEN and phosphorylated AKT expression and prognosis in early-and latestage non-small cell lung cancer［J］.Oncol Rep，2007，17（4）：853-857.

［2］Rychahou PG，Kang J，Gulhati P，et al.Akt2 overexpression plays a critical role in the establishment of colorectal cancer metastasis［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2008，105（51）：20315-20320.

［3］Arboleda MJ，Lyons JF，Kabbinavar FF，etal.Overexpression of AKT2／protein kinase Bbeta leads to up-regulation of beta1integrins，increased invasion，and metastasis of human breast and ovarian cancer cells［J］.Cancer Res，2003，63（1）：196-206.

［4］苗丽君，王静.Akt与肿瘤的研究进展［J］.国外医学·生理、病理科学与临床分册，2004，24（5）：406-409.

［5］Shiratsuchi H，Basson MD.Akt2，butnot Akt1 or Akt3mediates pressure-stimulated serum-opsonized latex bead phagocytosis through activating mTOR and p70 S6 kinase［J］.J Cell Biochem，2007，102（2）：353-367.

［6］Cheng GZ，Zhang W，Wang LH，et al.Regulation of cancer cell survival，migration，and invasion by Twist：AKT2 comes to interplay［J］.Cancer Res，2008，68（4）：957-960.

［7］Arboleda MJ，Lyons JF，Kabbinavar FF，etal.Overexpression of AKT2／protein kinase Bbeta leads to up-regulation of beta1 integrins，increased invasion，and metastasis of human breast and ovarian cancer cells［J］.Cancer Res，2003，63（1）：196-206.

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1672－2639（2012）02－0011－02

2012－02－05；责任编辑 王景鸿］